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[求救] trizol抽rna的問題 跑膠無結果

看板Biotech (生命科學)作者 (寧子阿斯阿斯)時間5年前 (2019/05/01 00:33), 5年前編輯推噓3(3推 0噓 12→)
留言15則, 3人參與, 5年前最新討論串1/1
本魯用trizol抽rna 照protocol做 測濃度30-40 ng/ul 吸光值260/280 有1.8 可是跑膠下去 什麼都沒有 連rna降解的漸層都沒有 只有marker在那裡亮... 覺得操作中可疑的地方： trizol感覺只分兩層 上層的澄清層 下面兩層幾乎沒什麼分層 pellet異常大塊 : 我的sample是海洋浮游微生物 感覺一開始的樣品的量都沒那麼多了 怎麼pellet跑一大塊出來 這是什麼的污染嗎? 還有想問一下 染dye的時候 protocol是說要70度加熱10分鐘 這樣RNA會降解嗎？ 實驗室學長姐們在做斑馬魚的胚胎實驗 之前也有讓我用斑馬魚的胚胎練習抽 有成功 這次我做的海洋浮游藻類 學長姐們也沒經驗 只能一起慢慢摸了... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.136.27.152 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1556641989.A.F23.html
推
05/01 01:09, 5年前 , 1F
建議你跑完膠後染 跑native 然後如果有比etbr更強的就
05/01 01:09, 1F
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05/01 01:09, 5年前 , 2F
用下去
05/01 01:09, 2F
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05/01 01:10, 5年前 , 3F
nanodrop常常很騙 跑膠才是真的 或是qubit
05/01 01:10, 3F
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05/01 01:10, 5年前 , 4F
trizol下去後要vortex一下 看不到中間層就是量很少而
05/01 01:10, 4F
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05/01 01:11, 5年前 , 5F
已
05/01 01:11, 5F
推
05/01 09:36, 5年前 , 6F
感覺藻沒破完全 nanodrop 很容易騙 尤其是一些有色素
05/01 09:36, 6F
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05/01 09:36, 5年前 , 7F
的組織 Ph/Chloroform 多洗幾次會好些
05/01 09:36, 7F
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05/01 15:59, 5年前 , 8F
對了最後要沈澱比較好喔
05/01 15:59, 8F
謝謝提醒 目前朝sample濃度太低and被降解去想
推
05/02 00:22, 5年前 , 9F
70度加熱10分鐘不會降解 但是95度加熱5分鐘會碎光光
05/02 00:22, 9F
pellet是白色的 用depc水回溶的時候因為看pellet有點多我就用50ul回溶 染dye後 跑膠lo 5ul應該是夠的吧
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05/02 00:22, 5年前 , 10F
pellet是透明的還是白色的?還是有其他顏色?
05/02 00:22, 10F
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05/02 00:23, 5年前 , 11F
跑膠下多少? 下太少看不見正常
05/02 00:23, 11F
※ 編輯: allmwh (223.136.27.152), 05/02/2019 00:54:39 ※ 編輯: allmwh (223.136.27.152), 05/02/2019 00:56:16
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05/02 11:47, 5年前 , 12F
每一家跑膠方式不同, 但你可以依照之前成功的量去算一下
05/02 11:47, 12F
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05/02 11:47, 5年前 , 13F
看你之前斑馬魚胚胎是下幾ug可以看到band
05/02 11:47, 13F
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05/02 11:49, 5年前 , 14F
我們家的一般跑膠第一次抽建議下1 ug不然看不到都是正常
05/02 11:49, 14F
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05/02 11:50, 5年前 , 15F
比較怕加水回溶後不是透明的, 白濁狀或有顏色會更難處理
05/02 11:50, 15F
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