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DNA電泳圖判讀

看板Biotech (生命科學)作者 (jacky1227)時間5年前 (2019/05/03 22:55), 編輯推噓8(8推 0噓 24→)
留言32則, 11人參與, 5年前最新討論串1/1
各位前輩好～～ 由於小弟是化工系對於電泳圖的判讀不太了解，請各位前輩多多指教～ 以下是小弟使用自製的pcr平台所跑出來的沙門氏菌DNA電泳圖（目標位置200bp) https://i.imgur.com/gPtlVAJ.jpg
請問各位前輩圖中band的位置過高，有可能是什麼原因所造成的？ 謝謝大家～～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.234.58.80 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1556895334.A.F31.html
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05/04 00:32, 5年前 , 1F
all genomic DNA
05/04 00:32, 1F
推
05/04 01:18, 5年前 , 2F
PCR失敗
05/04 01:18, 2F
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05/04 07:49, 5年前 , 3F
請問樓上兩位前輩造成失敗的原因是因為DNA未打開嗎
05/04 07:49, 3F
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05/04 07:49, 5年前 , 4F
？
05/04 07:49, 4F
推
05/04 08:32, 5年前 , 5F
你們的band跑的不錯欸
05/04 08:32, 5F
推
05/04 10:15, 5年前 , 6F
PCR 失敗沒東西，最上面的是gDNA
05/04 10:15, 6F
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05/04 10:29, 5年前 , 7F
總覺得這是1kb marker, 最下面是500bp嗎
05/04 10:29, 7F
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05/04 10:29, 5年前 , 8F
或250bp
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05/04 10:47, 5年前 , 9F
T大前輩最下面是100bp
05/04 10:47, 9F
推
05/04 11:44, 5年前 , 10F
1.marker大小要標示出來,你在做報告的時候最好也這樣
05/04 11:44, 10F
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05/04 11:44, 5年前 , 11F
對別人判斷上會比較容易了解
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05/04 11:45, 5年前 , 12F
2.sample條帶跑在marker最大片段位置甚至更上方一些
05/04 11:45, 12F
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05/04 11:46, 5年前 , 13F
這個是genomic DNA, 如果實驗有經過pcr那結果是失敗的
05/04 11:46, 13F
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05/04 11:47, 5年前 , 14F
3.做pcr之前你的template最好可以定量一下,下pcr的量不
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05/04 11:47, 5年前 , 15F
要太多
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05/04 11:47, 5年前 , 16F
最後三個跑道明顯是過量了....
05/04 11:47, 16F
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05/04 12:02, 5年前 , 17F
好的謝謝E大前輩的建議，不過我是同一管pcr試劑下去
05/04 12:02, 17F
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05/04 12:02, 5年前 , 18F
做實驗的，條件只有調整pcr溫度
05/04 12:02, 18F
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05/04 12:36, 5年前 , 19F
樣品若是agar上的菌落，用無菌tip尖端沾一下菌落，少到幾乎看
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05/04 12:37, 5年前 , 20F
不到的量作為pcr template。樣品若是菌液或DNA，可搜尋網路上
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05/04 12:38, 5年前 , 21F
pcr template amount有建議用量，若沒有定量儀器，可以試著將
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05/04 12:40, 5年前 , 22F
菌液或DNA作數個10X連續稀釋，分別做為template進行PCR，應能
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05/04 12:41, 5年前 , 23F
看見結果。有問題可再把結果放上來詢問看看。
05/04 12:41, 23F
推
05/04 15:35, 5年前 , 24F
primer加錯或是專一性不足,Taq沒加到或壞掉
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05/04 15:36, 5年前 , 25F
annealing溫度不對,這些都有可能
05/04 15:36, 25F
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05/04 15:38, 5年前 , 26F
實驗新手最好還是有一個人可以帶著你做一次
05/04 15:38, 26F
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05/04 15:52, 5年前 , 27F
謝謝各位前輩的建議～～
05/04 15:52, 27F
推
05/04 18:35, 5年前 , 28F
有positive control嗎？確定primer都可以用，且試劑都沒問題
05/04 18:35, 28F
推
05/06 10:17, 5年前 , 29F
我的經驗是沙門氏菌不用純化genomic
05/06 10:17, 29F
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05/06 10:18, 5年前 , 30F
培養液25/1就跑的出來，我是跑invA
05/06 10:18, 30F
推
05/06 13:45, 5年前 , 31F
要有positive control阿, 不只是sample, 连PCR平台也是要用
05/06 13:45, 31F
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05/06 13:45, 5年前 , 32F
确定是能用的机器来跑, PCR条件也都要确定
05/06 13:45, 32F
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