[求救] xenograft tumor model with matrigel
大家好
最近要用nod.scid小鼠打皮下做in vivo tumorigenicity
在細胞數配置流程的部分有問題想請教大家
懇請有經驗的各位分享和解答
會用兩種處理,兩種細胞數(10^5和10^6)的細胞數各打4隻
然後預計會跟matrigel 1:1混合用total 100ul的體積打進去
1、細胞配置的部分
我的想法是:細胞用Accutase打起後用4倍體積Serum free medium終止反應,直接進行細
胞計數來得知細胞總數後離心(1250 rpm, 3 mins)一次
離心後加入以適量PBS把細胞回溶成2*10^7/1ml,
然後直接在eppendorf中跟matrigel混合配成需要的總份數
(例如我打4隻,那就配250ul cell+250ul matrigel, 5*10^6 in 500ul 1:1 matrigel
100ul/mouse)
2、看有人是把細胞resuspend在PBS也有Serum-free medium
想請問兩個在使用時機上有很大的差別嗎?以我的model應該用哪種才適當呢?
2、由於要跟matrigel混合所以混完一定要放在冰上,
這樣我就讓細胞液冰冰的直接打到小鼠皮下?
3、因為要在實驗室配了細胞再拿到動物中心去打
這樣我的細胞要在哪個時間點移到針筒裡然後要怎麼移?
我的想法是在實驗室用eppendorf裝混好matrigel的細胞液放在冰上,
到動物中心再進hood用針筒吸100ul然後直接打,不知道我的想法有沒有錯?
第一次做動物實驗,盡可能的參考了一下各種的protocol,
但是細節上面沒有相關的操作經驗,
如果問了很愚蠢的問題還請各位見諒,
懇請各位的解答及經驗分享,謝謝!
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謝謝樓上三位的熱心分享,確實我沒考慮到針筒Dead space的問題,
看起來我確實得多配幾份,真的很謝謝大家~
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54), 05/06/2019 15:40:22
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