[求救] xenograft tumor model with matrigel

看板Biotech (生命科學)作者 (Shiburin)時間5年前 (2019/05/05 23:10), 5年前編輯推噓3(307)
留言10則, 3人參與, 5年前最新討論串1/1
大家好 最近要用nod.scid小鼠打皮下做in vivo tumorigenicity 在細胞數配置流程的部分有問題想請教大家 懇請有經驗的各位分享和解答 會用兩種處理,兩種細胞數(10^5和10^6)的細胞數各打4隻 然後預計會跟matrigel 1:1混合用total 100ul的體積打進去 1、細胞配置的部分 我的想法是:細胞用Accutase打起後用4倍體積Serum free medium終止反應,直接進行細 胞計數來得知細胞總數後離心(1250 rpm, 3 mins)一次 離心後加入以適量PBS把細胞回溶成2*10^7/1ml, 然後直接在eppendorf中跟matrigel混合配成需要的總份數 (例如我打4隻,那就配250ul cell+250ul matrigel, 5*10^6 in 500ul 1:1 matrigel 100ul/mouse) 2、看有人是把細胞resuspend在PBS也有Serum-free medium 想請問兩個在使用時機上有很大的差別嗎?以我的model應該用哪種才適當呢? 2、由於要跟matrigel混合所以混完一定要放在冰上, 這樣我就讓細胞液冰冰的直接打到小鼠皮下? 3、因為要在實驗室配了細胞再拿到動物中心去打 這樣我的細胞要在哪個時間點移到針筒裡然後要怎麼移? 我的想法是在實驗室用eppendorf裝混好matrigel的細胞液放在冰上, 到動物中心再進hood用針筒吸100ul然後直接打,不知道我的想法有沒有錯? 第一次做動物實驗,盡可能的參考了一下各種的protocol, 但是細節上面沒有相關的操作經驗, 如果問了很愚蠢的問題還請各位見諒, 懇請各位的解答及經驗分享,謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.224.1.123 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1557069045.A.F8D.html

05/05 23:40, 5年前 , 1F
Matrigel在二十幾度就會開始變成gel, 所以細胞液和針筒最好
05/05 23:40, 1F

05/05 23:41, 5年前 , 2F
都放在冰上.
05/05 23:41, 2F

05/05 23:42, 5年前 , 3F
SF medium/PBS 通常難長細胞我都用medium, 好長的隨便用!!?
05/05 23:42, 3F

05/05 23:44, 5年前 , 4F
參考用同樣細胞株的reference試試
05/05 23:44, 4F

05/05 23:45, 5年前 , 5F
記得多配不要配剛好, 針筒的dead volume和matrigel的特性會
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05/05 23:45, 5年前 , 6F
讓你損失很多體積, 如果先在lab混好細胞記得打之前還是先混
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05/05 23:46, 5年前 , 7F
05/05 23:46, 7F

05/05 23:53, 5年前 , 8F
同上,建議多配1-2組。針筒的那個頭………
05/05 23:53, 8F

05/06 14:41, 5年前 , 9F
我多配到0.4ml matrigel光是黏在eppendorf就損失很多了
05/06 14:41, 9F

05/06 14:43, 5年前 , 10F
會碰matrigel的東西都要先預冷 超過10度gel開始變果凍
05/06 14:43, 10F
謝謝樓上三位的熱心分享,確實我沒考慮到針筒Dead space的問題, 看起來我確實得多配幾份,真的很謝謝大家~ ※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54), 05/06/2019 15:40:22
文章代碼(AID): #1Splpr-D (Biotech)
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