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[求救] 大分子小分子同一張Western membrane

看板Biotech (生命科學)作者 (正經人)時間5年前 (2019/06/13 10:26), 編輯推噓9(9推 0噓 6→)
留言15則, 10人參與, 5年前最新討論串1/1
大家好 今天老闆叫我做一張Western 要把小分子(約16KD)還有大分子(大約110KD)跑在同一張membrane裡面 實驗室用的是7.5%的gel transfer 條件是100V 1hr 現在查到的資料都沒有說怎麼跑在一起 不知道有什麼建議嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.65.155 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1560392787.A.F31.html
推
06/13 11:09, 5年前 , 1F
%數應該要依照分子量做調整 如果你要跑同一張的話 依你
06/13 11:09, 1F
→
06/13 11:09, 5年前 , 2F
的狀況應該要調整至12% 110kDa直接剪75或100以上
06/13 11:09, 2F
→
06/13 12:28, 5年前 , 3F
如果大分子先跑，小分子後跑呢？
06/13 12:28, 3F
推
06/13 12:40, 5年前 , 4F
12% 跑， 我之前壓 15& 130kda的沒問題； transfer時
06/13 12:40, 4F
→
06/13 12:40, 5年前 , 5F
間拉長些讓大分子好過去就是
06/13 12:40, 5F
推
06/13 13:42, 5年前 , 6F
跑gradient gel阿
06/13 13:42, 6F
推
06/13 16:53, 5年前 , 7F
16跟110跑同一張gel 沒問題很好分開
06/13 16:53, 7F
→
06/13 16:53, 5年前 , 8F
建議可以跑10~12%的gel 基本上不用擔心跑不開 差很多
06/13 16:53, 8F
→
06/13 16:54, 5年前 , 9F
而且membrane還可以很豪邁的剪不用怕剪到band
06/13 16:54, 9F
推
06/13 18:19, 5年前 , 10F
用一般commercial gradient gel都辦得到吧？
06/13 18:19, 10F
推
06/13 23:06, 5年前 , 11F
沒錢可以自製8+12% step gel 啦，看你要多美
06/13 23:06, 11F
→
06/13 23:19, 5年前 , 12F
不在乎美觀的話 單一10% gel你這個kd範圍還可以接受
06/13 23:19, 12F
推
06/15 00:39, 5年前 , 13F
市售的 gradient gel,都可以啊！Transfer 用濕式，效率比較好
06/15 00:39, 13F
推
06/15 13:44, 5年前 , 14F
用gradient gel 或配12%+7.5% gel 結案。
06/15 13:44, 14F
推
06/20 15:24, 5年前 , 15F
大分子還是要拉開的，要省麻煩就自己搞 gradient
06/20 15:24, 15F
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