[求救] primer濃度誤差

看板Biotech (生命科學)作者 (ccc)時間5年前 (2019/08/16 13:28), 5年前編輯推噓7(706)
留言13則, 5人參與, 5年前最新討論串1/1
最近訂了一批primer,以往都造著datasheet給的回溶體積來回溶,但最近學長說把 回溶完的primer拿去nanodrop測會發現廠商給的回溶體積是不準的,我實際測完也發現差 了將近兩倍,想請問一下大家,primer濃度會影響到qPCR的準確性嗎? 我個人是以為只差在太多專一性不好,太少可能跑不出來而已?,但學長說準確性會 有差,這樣是否以前做的data都有疑慮QQ,想請問大家的意見! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.54.111 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1565933285.A.CDD.html

08/16 16:03, 5年前 , 1F
專一性跟準確性差在哪裡?
08/16 16:03, 1F
阿! 忘記說他的建議回溶體積都比較多,所以濃度應該比較低,所以應該只會有跑不出 來的問題? ※ 編輯: sianpa00 (140.112.54.111 臺灣), 08/16/2019 16:29:01

08/16 18:25, 5年前 , 2F
首先你如果primer是訂desalting 那裡面本來就會有不
08/16 18:25, 2F

08/16 18:25, 5年前 , 3F
純的小片段 再來第一代的nanodrop其實不準到靠北 第三
08/16 18:25, 3F

08/16 18:25, 5年前 , 4F
不管怎樣你的primer都得拉過standard curve才能拿來定
08/16 18:25, 4F

08/16 18:25, 5年前 , 5F
量啊
08/16 18:25, 5F
所以直接用nanodrop來定量是不對的? 我應該相信data sheet上的定量對嗎? ※ 編輯: sianpa00 (27.242.130.58 臺灣), 08/16/2019 21:22:03

08/16 22:42, 5年前 , 6F
不要管定量 總之用同一組同樣量的primer拉standard cu
08/16 22:42, 6F

08/16 22:42, 5年前 , 7F
rve跟sample
08/16 22:42, 7F

08/18 20:30, 5年前 , 8F
差兩倍也差太多? 是選ssDNA定量嗎?
08/18 20:30, 8F

08/19 18:30, 5年前 , 9F
不管廠商合成的濃度或你用nanodrop測定的都是不準的
08/19 18:30, 9F

08/19 18:36, 5年前 , 10F
但您問的是引子濃度是否會影響qpcr 答案是會 但不一定
08/19 18:36, 10F

08/19 18:38, 5年前 , 11F
您可以作一個前後因子分別2倍序列稀釋的測試矩陣
08/19 18:38, 11F

08/19 18:39, 5年前 , 12F
就可以解答你的問題
08/19 18:39, 12F

08/22 11:58, 5年前 , 13F
真的想知道的話 可以用Qubit 非常準
08/22 11:58, 13F
文章代碼(AID): #1TLZxbpT (Biotech)
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