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[求救] ELISA數值越做越低

看板Biotech (生命科學)作者 (逐夢彗星)時間5年前 (2019/08/25 16:53), 編輯推噓6(6推 0噓 12→)
留言18則, 8人參與, 5年前最新討論串1/1
小弟最近拿先前收的病人plasma來做ELISA，我們家用的是R&D的96 well kit 並且抽同事的plasma做為盤跟盤的control來進行校正 我的所有samples，包含ELISA操作過程的capture Ab、Standard、Detective Ab等，都有進行分裝冰-80 (有些要求只能冰4度的也都要照做) 而control在抽完血當天也有進行不同倍率的稀釋和分裝 每次ELISA的materials和control都是從-80拿新的一個分裝管 檢體頂多也只有重複解凍一兩次 另外由於plasma太濃，每次做的時候檢體有做50倍稀釋(每次都稀釋一樣倍率) 但最近做了幾次發現無論是control或是所有的檢體OD一次都比一次低(所有操作過程都一樣) 第一次各個檢體普遍在1點多，第二次掉到0.4~0.7左右，最近這週做卻更掉到0.2~0.3左右 甚至這星期做的stadard數值也開始降(但每次R平方都還是有達到0.995以上) 本來想說是來回解凍的關係，但連同control數值都在掉實在無法解釋啊啊啊 有人有過類似的經驗嗎？ 想請問我可能哪個環節操作有問題？該如何改善？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.233.81.172 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1566723227.A.1BE.html
推
08/25 17:27, 5年前 , 1F
溫度？就算有降，control內插拉出來的數字是對的嗎？
08/25 17:27, 1F
→
08/25 17:42, 5年前 , 2F
溫度的話都是放室溫反應。內插後發覺control的數字
08/25 17:42, 2F
→
08/25 17:42, 5年前 , 3F
也跟著降，就好像所有東西都在degrade的感覺@@
08/25 17:42, 3F
推
08/26 19:47, 5年前 , 4F
TMB 壞惹 (？)
08/26 19:47, 4F
→
08/30 09:18, 5年前 , 5F
blocking buffer有沒有問題啊？
08/30 09:18, 5F
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08/31 16:02, 5年前 , 6F
我blocking buffer每次都重配，甚至連PBS都重配了，
08/31 16:02, 6F
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08/31 16:02, 5年前 , 7F
sample也都取新的分裝管來做，結果standard curve很
08/31 16:02, 7F
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08/31 16:02, 5年前 , 8F
完美，但所有sample的數值仍然只有0.1~0.2(有做和之
08/31 16:02, 8F
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08/31 16:02, 5年前 , 9F
前一樣倍率的稀釋，但之前數值明明可以達到1左右啊
08/31 16:02, 9F
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08/31 16:02, 5年前 , 10F
)
08/31 16:02, 10F
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08/31 16:05, 5年前 , 11F
這是今天的結果，左邊三行是standard，由上而下濃度
08/31 16:05, 11F
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08/31 16:05, 5年前 , 12F
遞減
08/31 16:05, 12F
→
08/31 16:05, 5年前 , 13F
08/31 16:05, 13F
推
09/01 03:43, 5年前 , 14F
買新冷氣
09/01 03:43, 14F
推
09/16 13:38, 5年前 , 15F
不是substrate壞了，就是plasma壞了
09/16 13:38, 15F
推
09/20 13:28, 5年前 , 16F
elisa reader 壞惹
09/20 13:28, 16F
推
11/14 15:52, 5年前 , 17F
ELISA的燈泡有壽命 可以請工程師看看 我之前做也是不
11/14 15:52, 17F
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11/14 15:52, 5年前 , 18F
同週有不同讀值 說是燈泡問題
11/14 15:52, 18F
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