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[方法] CRISPR/Cas9 KO細胞與HDR plasmid?

看板Biotech (生命科學)作者 (黃金騎士 牙狼)時間5年前 (2019/09/18 17:40), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
留言8則, 6人參與, 5年前最新討論串1/1
剛剛投的文章收到revise 實驗室一直以來都是用siRNA 和 shRNA做 knockdown 細胞 沒想到reviewer之一覺得siRNA已經過時了 要求用Crispr/cas9做knockout 上網查發現santa cruz有賣做好的CRISPR/Cas9 KO plasmid 買了plasmid後接下來看起來好像不是很難 transfection進到細胞後再用FACS把發光的細胞篩出來即可 但是看了santa cruz的protocol建議也要同時transfection HDR Plasmid HDR Plasmid也很貴 等於要買兩個 plasmid 想請問有經驗的人沒有HDR Plasmid 是DSB的修復會出問題 影響的是效率而已 還是說一定要有HDR Plasmid? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 133.87.71.225 (日本) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1568799658.A.AFF.html
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09/18 18:02, 5年前 , 1F
根據官網上的說法是幫你塞進去RFP 和Puro讓你可以篩選
09/18 18:02, 1F
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09/18 19:14, 5年前 , 2F
時間不夠的話,其實不用花這個心思去做
09/18 19:14, 2F
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09/18 19:17, 5年前 , 3F
而且你是用siRNA而不是shRNA或Cre KO,想要用CRISPR來驗證
09/18 19:17, 3F
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09/18 19:19, 5年前 , 4F
的話,也應該是用dCas9的CRISPRi,而不是Cas9的KO
09/18 19:19, 4F
推
09/18 19:56, 5年前 , 5F
應該先想想怎麼說服他你們的實驗就足夠證明假說吧
09/18 19:56, 5F
推
09/19 17:27, 5年前 , 6F
同意樓上...新潮的東西就是錢...哪有那麼有錢來Q皿Q
09/19 17:27, 6F
推
09/23 19:08, 5年前 , 7F
沒有HDR的話 就是靠NHEJ的隨機mutation把該基因knockout
09/23 19:08, 7F
推
09/29 22:41, 5年前 , 8F
推薦你找RNAiCore服務
09/29 22:41, 8F
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