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[求救] 脂肪肝之細胞模式建立

看板Biotech (生命科學)作者 (...)時間5年前 (2019/12/02 09:39), 編輯推噓9(9推 0噓 15→)
留言24則, 7人參與, 5年前最新討論串1/1
我們實驗室想建立脂肪肝的細胞模式，目前使用HepG2細胞, 餵食OA-BSA的medium, 造成脂肪堆積，來當成脂肪肝的細胞模式 (參考有的paper是這麼做的) 但是目前碰到一些問題 (1) 我們用的OA-BSA是直接買sigma的oleic acid(100mM OA in 100% ETOH) 與FFA-free BSA (2M in PBS)回來配製的, 以6 mM OA/1M BSA (6:1)的濃度 加入細胞培養24~48小時之後, 用Oil-Red-O staining來觀察lipid droplet 目測的染色有差異, 用isopropanol溶解後, 去測OD 510的吸光值 但是與control組比較起來, 並沒有明顯的差異 (2) 有查到文獻說, 這樣的處理會引起oxidative stress, 我們也用DCHDA染色 再上flow來觀察, 但是也沒有明顯的差異 想請教版上是否有做類似實驗的經驗, 是否有推薦induce 脂肪堆積的OA-BSA或者PA-OA的配方呢? (當初有嘗試以PA來做，但是PA的溶解度是個很大的問題跟挑戰) 以及我們的實驗方法是否有誤, 有需要改進的地方呢, 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.138.241.79 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1575250747.A.D31.html
推
12/02 12:25, 5年前 , 1F
我當初做 Huh7 是用1% FFA-BSA跟 100mM OA , 用 BODIP
12/02 12:25, 1F
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12/02 12:25, 5年前 , 2F
Y 染也有差異; 但我的 OA 是溶在20%MeOH
12/02 12:25, 2F
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12/02 12:28, 5年前 , 3F
OD 510是不是會測到其他東西啊？ 我之前是用顯微鏡一
12/02 12:28, 3F
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12/02 12:28, 5年前 , 4F
群一群拍， 然後定 LD 的量
12/02 12:28, 4F
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12/02 12:29, 5年前 , 5F
(註： 我的目的是看 VLDL secretion)
12/02 12:29, 5F
推
12/02 20:52, 5年前 , 6F
第一點:final濃度是多少?細胞種了多少用多少isopropanol溶?
12/02 20:52, 6F
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12/02 20:52, 5年前 , 7F
做了幾個重複?
12/02 20:52, 7F
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12/02 20:53, 5年前 , 8F
第二點:OA相對於PA毒性小很多，所以要測到oxidative stress
12/02 20:53, 8F
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12/02 20:55, 5年前 , 9F
或cell death的劑量要用更高。原因之一是OA更容易形成TG儲
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12/02 20:56, 5年前 , 10F
存在lipid droplets。PA沒有形成那麼多油滴但細胞死得快
12/02 20:56, 10F
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12/02 20:58, 5年前 , 11F
要溶PA在BSA溶液裡需要加熱、加NAOH及讓它們充分時間結合
12/02 20:58, 11F
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12/02 20:59, 5年前 , 12F
你可以找protocol或者是我可以很不要臉地推薦自己的論文XD
12/02 20:59, 12F
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12/03 08:23, 5年前 , 13F
感謝樓上兩位的經驗分享。其實本來是想說有沒有做相關
12/03 08:23, 13F
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12/03 08:23, 5年前 , 14F
脂肪肝細胞模式的實驗室，有protocol可以借我們參考的
12/03 08:23, 14F
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12/03 08:24, 5年前 , 15F
yuasa大可以提供您的大作給我們參考一下嗎，謝謝
12/03 08:24, 15F
推
12/03 20:34, 5年前 , 16F
借問一下 lipid secretion的機制找到了嗎?
12/03 20:34, 16F
推
12/04 18:21, 5年前 , 17F
oil red o 染完較容易殘留 建議你選用其他方式染色定量
12/04 18:21, 17F
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12/04 18:21, 5年前 , 18F
除非差異真的很大 OA要有大量堆積 可能要你的2-3倍劑量
12/04 18:21, 18F
推
12/04 18:36, 5年前 , 19F
看錯 以為你是用100uM
12/04 18:36, 19F
推
12/04 19:50, 5年前 , 20F
環境氧氣濃度沒有控制嗎？
12/04 19:50, 20F
推
12/04 21:29, 5年前 , 21F
I 大是說 hepatocyte嗎
12/04 21:29, 21F
推
12/04 23:59, 5年前 , 22F
是的 跟肝不熟
12/04 23:59, 22F
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12/05 19:08, 5年前 , 23F
站內信我。不然我怎麼給你我的論文
12/05 19:08, 23F
推
03/13 10:12, 5年前 , 24F
用oa/pa的複合配方效果不是會比較好嗎？
03/13 10:12, 24F
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