PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] clonogenic assay seeding

看板Biotech (生命科學)作者 (aten)時間5年前 (2019/12/09 16:07), 編輯推噓1(1推 0噓 11→)
留言12則, 4人參與, 5年前最新討論串1/1
各位前輩好，不才最近剛開始操作clonogenic assay 遇到關於種植極少數細胞的困擾 想請問各位有經驗的前輩的經驗，或是我可以如何改進 先謝謝各位前輩了 目前實驗步驟: 將細胞打下後，離心重新回溶1ml medium (此稱原管) 取100ul 原管細胞液+900ul medium配成管1，以管1來計算細胞 管1通常細胞算出來會在3*10^5 cells/ml 再將管1做10X稀釋成3*10^4 cells/ml (100ul 管1細胞液+900ul medium，此稱管2) 我是將細胞種在6 well, 每well種100顆或200顆細胞，以種植100顆cell為例 我會在新eppendorf裡，取33ul 管2細胞液(1000顆cell) +967ul medium 配成100 cells/100ul (此稱管3)，將管3取100ul 細胞液進6 well內， 最後再補2ml medium，集結束種植 有確認每次取細胞及稀釋前都有充分pipetting 但是seeding的細胞數都不到原訂的1成(需要種100顆cell只有長出不到10個colony) (細胞沒有經過藥物或是任何刺激處理) 想請問各位前輩能不能提供給不才一些建議和經驗分享呢? 非常感謝各位前輩撥冗觀看的我問題，謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.15.178.40 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1575878834.A.6D9.html
→
12/09 16:43, 5年前 , 1F
種多長少很正常，雖然有細胞種類之間的差異，但是單顆
12/09 16:43, 1F
→
12/09 16:43, 5年前 , 2F
細胞周圍沒同伴本來就孤單寂寞覺得冷很容易死。
12/09 16:43, 2F
→
12/09 16:44, 5年前 , 3F
看你實驗的目的是什麼吧？你可以試試提高細胞量，測幾
12/09 16:44, 3F
→
12/09 16:45, 5年前 , 4F
個濃度範圍後選長出來的colony數量密度符合你需要的條
12/09 16:45, 4F
→
12/09 16:45, 5年前 , 5F
件來做
12/09 16:45, 5F
→
12/09 16:46, 5年前 , 6F
或是可以試試看用conditioned medium養，細胞密度太低
12/09 16:46, 6F
→
12/09 16:47, 5年前 , 7F
可能讓medium中缺少某種細胞分泌的生長因子，用
12/09 16:47, 7F
→
12/09 16:47, 5年前 , 8F
condictioned medium或許可以解決
12/09 16:47, 8F
→
12/09 17:49, 5年前 , 9F
細胞有時喜歡貼在牆邊，用顯微鏡找找
12/09 17:49, 9F
推
12/10 14:03, 5年前 , 10F
加 1/4 細胞打下前的 medium 養看看，讓它有附近有同伴的錯
12/10 14:03, 10F
→
12/10 14:03, 5年前 , 11F
覺。
12/10 14:03, 11F
→
12/11 01:55, 5年前 , 12F
好的，謝謝各位前輩的建議，我會試試看的^^
12/11 01:55, 12F
‣ 更多 bahrimank 的文章
文章代碼(AID): #1TxW2oRP (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 bahrimank 的文章
文章代碼(AID): #1TxW2oRP (Biotech)