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[求救] qPCR如何測量最小極限值

看板Biotech (生命科學)作者 (三途河的擺渡人)時間5年前 (2020/01/08 00:35), 編輯推噓1(1推 0噓 9→)
留言10則, 3人參與, 4年前最新討論串1/1
大家好 如標題 想請問如何用real time PCR 測量最小極限值LOD 我知道傳統電泳的方式 就是先定量DNA濃度後連續稀釋 電泳看band有無 不過qPCR我就不懂了 難道不是每次用已知濃度做標準曲線再看Ct就好了嗎? 這方面查了資料還是不太懂 所以上來請教 感謝各位幫忙 ----- Sent from JPTT on my Samsung SM-G955F. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.136.160.89 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1578414926.A.0EA.html
推
01/09 00:12, 5年前 , 1F
用分子量計算標準品copy number後 序列稀釋qPCR
01/09 00:12, 1F
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01/09 00:14, 5年前 , 2F
看Ct值退後情況 以及Ct躺平的最低稀釋度即可推測LOD
01/09 00:14, 2F
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01/15 16:57, 5年前 , 3F
我用 lod qpcr 下去辜狗蠻多資訊的，可以看看
01/15 16:57, 3F
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02/07 13:30, 4年前 , 4F
序列稀釋後得到一檢量線，針對該檢量線的Standard
02/07 13:30, 4F
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02/07 13:38, 4年前 , 5F
error算出數值，而後以斜率除以該se(Y)得到的數字乘上
02/07 13:38, 5F
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02/07 13:49, 4年前 , 6F
3.3得到機器的LOD乘上10得到LOQ
02/07 13:49, 6F
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02/07 13:50, 4年前 , 7F
而後把機器的LOQ作為樣品的添加濃度重複7次or以上
02/07 13:50, 7F
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02/07 13:51, 4年前 , 8F
計算標準差(S)，而後帶入LOD = t0.99 * S。t0.99
02/07 13:51, 8F
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02/07 13:52, 4年前 , 9F
用excel =T.INV(0.99,df)計算就可以得到真實的LOD
02/07 13:52, 9F
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02/07 13:52, 4年前 , 10F
乘上10就是LOQ了
02/07 13:52, 10F
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