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[求救] SDS-PAGE有一條很緊密的線

看板Biotech (生命科學)作者 (virusman)時間4年前 (2020/02/24 14:44), 編輯推噓6(6推 0噓 22→)
留言28則, 11人參與, 4年前最新討論串1/1
各位前輩先進好，小弟不才來求教了~ 首先附上一張照片 http://i.imgur.com/UFnGuyH.jpg
我的問題是為什麼膠片的最下面會有一條緊縮的條帶呢？ 連ladder都會有一樣的情形，所以猜測是膠片本身的問題，但實在不知道問題出在哪... 我的stacking gel是4%，saparation gel是12%。 stacking gel buffer成分是0.5M的tris, 0.4% TEMED, pH 6.8 separación gel buffer成分是1.5M的tris, 0.36% TEMED, pH 8.8 acrylamide是SERVA出的40% Acrylamide-Bis 凝膠時間各30分鐘，用isopropanol壓膠 電泳條件是120~150V跑兩小時（每次電壓都不太一樣，但都是單一電壓跑到底） 大概就是這樣，請大大們提供些意見，感激不盡QQ ----- Sent from JPTT on my HTC_U-1u. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.60.35 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1582526654.A.104.html
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02/24 14:57, 4年前 , 1F
最下面那條...loading dye?
02/24 14:57, 1F
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02/24 15:00, 4年前 , 2F
所有分不開的小分子也都會在那最底下吧...?
02/24 15:00, 2F
推
02/24 17:39, 4年前 , 3F
看marker好像還沒全部跑開，所以會擠在一起
02/24 17:39, 3F
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02/24 17:41, 4年前 , 4F
你要的大小有出來的話，那條不用太在意
02/24 17:41, 4F
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02/25 00:32, 4年前 , 5F
正常 給你看看有無跳海用
02/25 00:32, 5F
推
02/25 18:27, 4年前 , 6F
正常吧，不然怎麼知道跑到哪裡了
02/25 18:27, 6F
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02/26 00:38, 4年前 , 7F
你的Marker是10-180總共10個條帶的那個嗎？
02/26 00:38, 7F
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02/26 00:40, 4年前 , 8F
如果你要看的蛋白是 >25 kDa，那就不影響，不用在意這
02/26 00:40, 8F
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02/26 00:40, 4年前 , 9F
個問題，除非你要看的蛋白質有<25 kDa的才要煩惱。
02/26 00:40, 9F
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02/26 00:41, 4年前 , 10F
不過.....我猜你的gel buffer是用acetic acid調pH的？
02/26 00:41, 10F
推
02/27 19:51, 4年前 , 11F
正長阿，沒染就有那條了不是?就看電涌跑到哪而已阿
02/27 19:51, 11F
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02/27 19:51, 4年前 , 12F
送出後才發現錯字好多XD
02/27 19:51, 12F
推
02/28 15:17, 4年前 , 13F
正常啊 你第一次跑？
02/28 15:17, 13F
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03/04 15:19, 4年前 , 14F
最下面那條線...不是叫leading dye嗎?
03/04 15:19, 14F
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03/04 15:19, 4年前 , 15F
理由同Ki跟mcy大
03/04 15:19, 15F
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03/04 17:07, 4年前 , 16F
Dye在染色的過程有可能被洗掉，而且marker也有，一般
03/04 17:07, 16F
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03/04 17:07, 4年前 , 17F
marker是不會加loading buffer的，正確的說那條線是
03/04 17:07, 17F
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03/04 17:14, 4年前 , 18F
leading ion的最尾端，所有跑的比trailling ion慢的蛋
03/04 17:14, 18F
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03/04 17:15, 4年前 , 19F
白質都會被擠在這個交界
03/04 17:15, 19F
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03/04 17:15, 4年前 , 20F
更正，所有跑的比trailing ion "快"的蛋白質
03/04 17:15, 20F
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03/04 17:17, 4年前 , 21F
其實SDS-PAGE的原理比一般認知的要複雜的多，大多數人
03/04 17:17, 21F
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03/04 17:18, 4年前 , 22F
可能都是學「蛋白質因SDS而帶負電所以在電場中往正極
03/04 17:18, 22F
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03/04 17:18, 4年前 , 23F
跑」。但是根本不是這麼一回事，蛋白質帶負電是必要條
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03/04 17:19, 4年前 , 24F
件，但不是充分條件
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03/09 16:17, 4年前 , 25F
loading dye
03/09 16:17, 25F
推
03/13 00:04, 4年前 , 26F
protein degradation
03/13 00:04, 26F
推
03/22 13:10, 4年前 , 27F
這很正常，就是loading dye，覺得看了很不爽可以跑久一
03/22 13:10, 27F
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03/22 13:10, 4年前 , 28F
點把它跳海跳掉
03/22 13:10, 28F
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