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[求救] WB 有半邊的band會消失

看板Biotech (生命科學)作者 (我想要ㄉ幸福M)時間4年前 (2020/08/07 16:43), 編輯推噓6(6推 0噓 9→)
留言15則, 4人參與, 4年前最新討論串1/1
求救版上的大大們 最近做了幾次WB都是不同sample來自動物或細胞,用濕式transfer 但都遇到同樣的問題 如圖https://imgur.com/a/w6eY5lN 有一個target右半邊大約從well 6-7地方 (10 well)開始的band都會消失 甚至有一個actin 在well 7的地方也變弱(如exp4)， 想請問大大有可能是哪裡出了問題呢? 跪求各位大大解答 感謝~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.125.14 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1596789819.A.1AF.html
推
08/07 18:07, 4年前 , 1F
沒夾緊，不然就是夾太緊
08/07 18:07, 1F
推
08/07 19:33, 4年前 , 2F
確定不是expression下降？actin看起來滿好的啊
08/07 19:33, 2F
推
08/07 19:38, 4年前 , 3F
blocking前染個ponceau s看看transfer的效果？
08/07 19:38, 3F
推
08/07 19:41, 4年前 , 4F
還有要確認hy抗體時是否有沒泡到的地方 邊邊角角之類
08/07 19:41, 4F
→
08/07 19:41, 4年前 , 5F
的
08/07 19:41, 5F
推
08/07 20:14, 4年前 , 6F
之前有遇過目標蛋白大於100kDa，如果一次磨很多sample
08/07 20:14, 6F
→
08/07 20:14, 4年前 , 7F
，越後面磨的band會越淡。但是小分子的internal contro
08/07 20:14, 7F
→
08/07 20:14, 4年前 , 8F
l和ponceau s看不出差別。之後每磨好一個sample就丟到-
08/07 20:14, 8F
→
08/07 20:14, 4年前 , 9F
20度，全部磨完再一起煮，就沒有這個問題了。
08/07 20:14, 9F
→
08/07 20:19, 4年前 , 10F
更正，越早磨的越淡
08/07 20:19, 10F
推
08/08 16:23, 4年前 , 11F
樓上有放protease inhibitor?還是什麼奇妙的post-tran
08/08 16:23, 11F
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08/08 16:23, 4年前 , 12F
slational mod
08/08 16:23, 12F
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08/09 18:12, 4年前 , 13F
對~~沒有放protease inhibitor，只有加sample buffer。
08/09 18:12, 13F
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08/09 18:12, 4年前 , 14F
我當初猜比較早磨的蛋白會被降解，所以丟-20，但不知道
08/09 18:12, 14F
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08/09 18:12, 4年前 , 15F
為什麼這個現象在大分子蛋白特別明顯
08/09 18:12, 15F
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