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討論串[問題] 大片段產物的 PCR
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#4
Re: [問題] 大片段產物的 PCR
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者pigy (pigy)時間19年前 (2006/05/03 05:18), 編輯資訊
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我覺得你可以試試把annealing溫度調得再低一點，. 因為通常最適溫度會比預測溫度低五到十度. 如果你的primer有secondary structure或GC含量高，. 可以像前面有人建議的，用58度加dmso. pfu和一般的taq最大的差別是他有3'->5'profreading的功能，
(還有56個字)
#3
Re: [問題] 大片段產物的 PCR
推噓0(0推 0噓 1→)留言1則，0人參與, 最新作者dorphilvet ( )時間19年前 (2006/05/03 00:44), 編輯資訊
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如果是我的話，我的方法是:. taq 則是用taq + pfu各一半，但有的pfu是68℃感作，所以要注意. tm:58度，但我會加1ul的DMSO. ^^希望對你有幫助. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 61.64.162.223.
#2
Re: [問題] 大片段產物的 PCR
推噓0(0推 0噓 1→)留言1則，0人參與, 最新作者domeco (雨中小語)時間19年前 (2006/05/02 21:00), 編輯資訊
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可以參閱一下，會比較快進入狀況。基礎PCR 作者： 張建裕:張建國/著. http://www.books.com.tw/exep/prod/booksfile.php?item=0010266910 ^^-->時間長了些，很可能減低酵素活性，個人覺得3min以內，甚至可略 大致算法有兩種，一種是粗
(還有202個字)
#1
[問題] 大片段產物的 PCR
推噓3(3推 0噓 1→)留言4則，0人參與, 最新作者elderbear (曖昧不好不要曖昧)時間19年前 (2006/05/02 15:24), 編輯資訊
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我是參考某篇 paper 的作法. 產物從500bp~3kbp 都有. 所使用的enzyme是 ampliTaq Gold polymerase. PCR program. 95度 10min. 95度 1min ___. 55度 2min |45cycles. 72度 2min ___|. 72度
(還有443個字)
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