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討論串[問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
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#5
Re: [問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
推噓3(3推 0噓 0→)留言3則，0人參與, 最新作者littlebu (LittleBU)時間19年前 (2006/05/23 23:55), 編輯資訊
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我的步驟是Oligo-dT 1ul + dNTP 1ul +. RNA + Nuclease-free 11ul -> 65'C, 5min. 回冰上之後再加上. Inhibitor, SSIII, DTT各1ul + Buffer 4ul. 我用的是Promega的Isolation Kit. 他
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#4
Re: [問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者aggaci (有氣質的台客)時間19年前 (2006/05/23 23:39), 編輯資訊
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沒有(不過得先加oligo-dT進行annealing). 可以. 盡量不要，濃度不夠. 若為定量實驗，那就用1 micro-gram做，不會怎麼樣. 建議不要，若要濃縮何不當初以DEPC water溶RNA時體積減少?. RNA不比DNA，他是非常脆弱的. --. http://0rz.net/d
#3
Re: [問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者littlebu (LittleBU)時間19年前 (2006/05/23 22:32), 編輯資訊
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再請教一下. 做RT的時候. 加入藥品的順序有無一定？. 另外Inhibitor, SSIII, DTT, Buffer一定要各加各的嗎？. 還是也可以像做PCR那樣先混成MIX再分給各管？. 會有什麼影響？. 還有RNA的濃度不足200的時候. 如果要取2ug去RT. 要如何做濃縮的動作？. 有人
#2
Re: [問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
推噓0(0推 0噓 3→)留言3則，0人參與, 最新作者aggaci (有氣質的台客)時間19年前 (2006/05/23 00:55), 編輯資訊
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沒差，我都請生工合oligo-dT. 我猜是degradation或是你某種成分沒加到，或沒表現. 跟你差不多(我是total RNA). --. http://0rz.net/da0PG 我的相簿..... --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.114.10
#1
[問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題
推噓2(2推 0噓 4→)留言6則，0人參與, 最新作者littlebu (LittleBU)時間19年前 (2006/05/22 23:14), 編輯資訊
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1. 我看Promega Oligo-dT的說明上寫它是18個T的Primer. 請問這種Oligo-dT跟自己請廠商合成18個T會有什麼差異？. 會比較好用？還是沒什麼差？. 請問有LAB是請廠商合成18個T來用嗎？. 2. 請問抽完RNA後的吸光值質量都不錯，結果轉出cDNA沒有成功. 這樣是代
(還有19個字)
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