[問題] 請教關於RT-PCR的幾個問題

看板Biotech (生命科學)作者 (LittleBU)時間19年前 (2006/05/22 23:14), 編輯推噓2(204)
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1. 我看Promega Oligo-dT的說明上寫它是18個T的Primer 請問這種Oligo-dT跟自己請廠商合成18個T會有什麼差異? 會比較好用?還是沒什麼差? 請問有LAB是請廠商合成18個T來用嗎? 2. 請問抽完RNA後的吸光值質量都不錯,結果轉出cDNA沒有成功 這樣是代表mRNA佔的比例太少?還是mRNA被破壞?還是其他可能原因? 因為還沒有跑RNA GEL,所以都只能猜測 3. 請問一般實驗室轉cDNA是取多少量的RNA? 我們是 2ug -> 20ul cDNA 請大家指點迷津,謝謝 TT -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 219.87.224.176

05/22 23:27, , 1F
另外如果Negative有band, cDNA卻沒有,又是什麼情形 Orz..
05/22 23:27, 1F

05/23 10:59, , 2F
bp是多大...
05/23 10:59, 2F

05/23 14:27, , 3F
跟產物一樣在194的位置,應該也不是primer亂接的
05/23 14:27, 3F

05/23 22:49, , 4F
RNA沒有跑膠確定品質的話就有可能是RNA的問題了
05/23 22:49, 4F

05/23 22:51, , 5F
一般都是5ug 的 RNA -----> 20ul cDNA (RT kit 上有建議)
05/23 22:51, 5F

05/23 23:53, , 6F
可惜我的RNA濃度不高,2ug都要靠濃縮了, 謝謝您的建議
05/23 23:53, 6F
文章代碼(AID): #14STKzbz (Biotech)
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