討論串[問題] PCR 越來越神了,麻煩大家幫我解惑
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推噓4(4推 0噓 1→)留言5則,0人參與, 最新作者wenniefrog (wenniefrog)時間19年前 (2006/07/18 02:47), 編輯資訊
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你的主要問題是 剛做好的cDNA作第一次PCR的時候有訊號. 可是拿同樣的cDNA再做幾次實驗結果就越來越弱?. 如果是這樣的話 很可能真的是cDNA degrade了. cDNA沒有你想像中的強壯 冷凍解凍數次以後很容易降解. 我以前會作完cDNA以後馬上分裝 存在-20度. 每次就只拿一個bat

推噓1(1推 0噓 0→)留言1則,0人參與, 最新作者goddogic.時間19年前 (2006/07/17 14:58), 編輯資訊
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> 我DNA都存在-40度喔. > 不過如果你們實驗室沒有這樣的冷凍櫃就沒辦法了. -40嗎 我問問看老師有沒有. > 只能說 趕快用掉吧. > 至於你的PCR... > 你沒說你不同條件是哪裡不同耶?. 條件是因為另一組引子長度跟GC%不同 所以PCR才換條件. 這2組引子做出來都沒有nonspe
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推噓1(1推 0噓 0→)留言1則,0人參與, 最新作者gwendiline (或許 我喜歡你)時間19年前 (2006/07/17 13:37), 編輯資訊
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我DNA都存在-40度喔. 不過如果你們實驗室沒有這樣的冷凍櫃就沒辦法了. 只能說 趕快用掉吧. 至於你的PCR... 你沒說你不同條件是哪裡不同耶?. 通常越亮表示產物越多. 產物越多 表示鏈合反應條件比較不嚴苛. (通常是溫度比較低). 或是cycle數比較多. 如果同樣條件 作不同重複 而有你

推噓1(1推 0噓 0→)留言1則,0人參與, 最新作者goddogic (狗狗)時間19年前 (2006/07/17 13:08), 編輯資訊
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我是抽RNA-->RT--> cDNA-> PCR. 第一次很亮. 但是拿同樣的cDNA同樣PCR條件: 第二次PCR亮度減為1/10. 第3次減為1/100. 第4次就看不到了. ==============================================. 換不同對引子,相同cD
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