Re: [問題] PCR 越來越神了,麻煩大家幫我解惑
※ 引述《goddogic (狗狗)》之銘言：
: 我是抽RNA-->RT--> cDNA-> PCR
: 第一次很亮
: 但是拿同樣的cDNA同樣PCR條件: 第二次PCR亮度減為1/10
: 第3次減為1/100
: 第4次就看不到了
: ==============================================
: 換不同對引子,相同cDNA,不同PCR條件
: PCR第一次很亮,第二次PCR亮度減為1/10
: 第3次減為1/100
: 第4次就看不到了
: ==============================================
: 加enhancer : 5% glycerol ==> 結果反而沒有band
: 還是原本只加5% DMSO 有band
: 但是:相同cDNA相同PCR條件
: PCR第一次很亮,第二次PCR亮度減為1/10
: 第3次減為1/100
: 第4次就看不到了
: =============================================
: 我們把cDNA存在-20度C 應該不會degrade阿
: 拜託大家幫忙 ><"
: 我覺得這件事情很有趣
: 可是不解決我的實驗做不出來
我DNA都存在-40度喔
不過如果你們實驗室沒有這樣的冷凍櫃就沒辦法了
只能說 趕快用掉吧
至於你的PCR..
你沒說你不同條件是哪裡不同耶?
通常越亮表示產物越多
產物越多 表示鏈合反應條件比較不嚴苛
(通常是溫度比較低)
或是cycle數比較多
如果同樣條件 作不同重複 而有你所說的那個情形
很有可能是DNA degrad了
不管怎樣 你最好先做個小實驗
一部分一部分確定 看是哪個環節有問題
就是所有條件都固定 只有一個變因 慢慢試
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.192.30
推
07/17 16:19, , 1F
07/17 16:19, 1F
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