Re: [問題] PCR 越來越神了,麻煩大家幫我解惑
> 我DNA都存在-40度喔
> 不過如果你們實驗室沒有這樣的冷凍櫃就沒辦法了
-40嗎 我問問看老師有沒有
> 只能說 趕快用掉吧
> 至於你的PCR..
> 你沒說你不同條件是哪裡不同耶?
條件是因為另一組引子長度跟GC%不同 所以PCR才換條件
這2組引子做出來都沒有nonspecific band
annealing temp 是49度左右
> 通常越亮表示產物越多
> 產物越多 表示鏈合反應條件比較不嚴苛
> (通常是溫度比較低)
> 或是cycle數比較多
> 如果同樣條件 作不同重複 而有你所說的那個情形
> 很有可能是DNA degrad了
用第一組引子PCR之後,第一次很亮,第二次1/10,第三次...就看不到了
這時我也以為cDNA degrade 但是用這一管cDNA (認為應該degrade光)
用另一對引子: 第一次有band 且很亮
但是用這一對再做第二次第三次...看不見了 = =
> 不管怎樣 你最好先做個小實驗
> 一部分一部分確定 看是哪個環節有問題
> 就是所有條件都固定 只有一個變因 慢慢試
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生命 就該浪費在美好的食物上...
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07/17 17:44, , 1F
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