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討論串[問題] western blotting

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Re: [問題] western blotting

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者boblu.時間18年前 (2007/08/31 23:45)資訊

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※ 引述《shiouchou.bbs@ptt.cc》之銘言：. > 想請問一下. > 我最近western blot 的時候. > 常常會出現membrane 在加完ECL 後. > 整片發螢光的現象. > 導致之後壓片結果是片子ㄧ片黑 (形狀就是membrane 的形狀). > 可是我之前依照相同

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[問題] western blotting

推噓5(5推 )留言5則，0人參與作者shiouchou時間18年前 (2007/08/30 11:56)資訊

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想請問一下. 我最近western blot 的時候. 常常會出現membrane 在加完ECL 後. 整片發螢光的現象. 導致之後壓片結果是片子ㄧ片黑 (形狀就是membrane 的形狀). 可是我之前依照相同的實驗條件跟藥品. 實驗都不會這樣 (例如:前ㄧ天做都正常隔ㄧ天就整片黑). 想請問是

Re: [問題] western blotting

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者banlance (nona)時間19年前 (2006/09/27 21:12)資訊

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我雖然沒有做過P-AKT. 不過我也曾經被搞的很慘. 我那時候是做PP38. 所以提供你一些方向. A>先確認sample有無問題. 可以以actin測試現有的membrane來確認. B>上述OK的話. 其實可以調一下1Ab，2Ab的條件例如溫度時間濃度. 雖然說明書有他的條件. 可是SAMPLE

Re: [問題] western blotting

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者tkmax (給妳超強運~ :D)時間19年前 (2006/09/23 23:44)資訊

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^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^. 這步驟很重要,要看磷酸化蛋白. lysate一收下來就要快跑wetern了. 不管有沒有加phosphotase inhibitor. 一進-80冰箱保存的話就都會degrade掉了~. --. ζ ●. ■ν). 到了最後在身

Re: [問題] western blotting

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者paua (waiting for good news)時間19年前 (2006/09/22 15:44)資訊

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我也有做P-Akt，但sample與你不同。. 我說說我的步驟:. 1. fresh cell lysate (收sample之後，馬上定量、跑膠). 2. 蛋白質定量後，40-50 ug/lane (小片膠). 3. transfer (semi dry) 15V (30-45min/1 mini

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