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討論串[問題] 關於cloning

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Re: [問題] 關於cloning

推噓1(1推 )留言1則，0人參與作者werthers6925 (...)時間19年前 (2007/02/13 13:00)資訊

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請問...你是做不出來? 還是在做之前先問清楚比例??. 我之前有做過類似的clone. 我是將一段linker(約40bp)接到plasmid上, 並且是oligo合成之後用RE切. 老實說, vector和insert的比例根本不重要..... 只要把握一個要點....insert的分子數>>v

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Re: [問題] 關於cloning

推噓0(0推 )留言1則，0人參與作者jaycao (風一吹特別冷)時間19年前 (2007/02/12 14:45)資訊

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不用太care比例的問題. 總之insert越多越好. 我一向都是1微升的vector和7.5微升的insert，再加1微升buffer和o.5微升（酉每），. 好像你們台灣叫酵素，好奇怪的名字，呵呵. 等長出克隆之後，多挑一些，放在eppendorf管搖，每個接200微升左右的LB. 37度搖3-

(還有114個字)

Re: [問題] 關於cloning

推噓4(4推 )留言6則，0人參與作者aswen ( )時間19年前 (2007/02/11 17:37)資訊

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我之前做過也是將一段約50 bp的insert接到約5kb的vector上. 試了很多不同比例後. 覺得約5:1~10:1都可以. 但重點是把所有長出來的clone都挑來做 PCR (數量不會多到上百個). 一定可以找到有ligation的. (我用的是 Invitrogen Zero blunt

Re: [問題] 關於cloning

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者philesazumi (苦悶阿)時間19年前 (2007/02/10 18:30)資訊

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大小太過懸殊，沒有比較容易接，. 而且也不容易跑膠看有沒接上. 可以先跟小一點（幾百bp）的先接完. 再接到vector上. (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector. molar ratio (

[問題] 關於cloning

推噓2(2推 )留言2則，0人參與作者Adler (Adler)時間19年前 (2007/02/10 17:05)資訊

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我想要將一段只有50初b.p.的tag. 接到一個約5kb的vector上. 想要請問一下有沒有人做過類似的實驗. 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少. 我已經試過許多比例了...@@. 謝謝大家. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ F

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