Re: [問題] 關於cloning
※ 引述《Adler (Adler)》之銘言：
: 我想要將一段只有50初b.p.的tag
: 接到一個約5kb的vector上
: 想要請問一下 有沒有人做過類似的實驗
: 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少
: 我已經試過許多比例了...@@
: 謝謝大家
不用太care比例的問題
總之insert越多越好
我一向都是1微升的vector和7.5微升的insert，再加1微升buffer和o.5微升（酉每），
好像你們台灣叫酵素，好奇怪的名字，呵呵
等長出克隆之後，多挑一些，放在eppendorf管搖，每個接200微升左右的LB
37度搖3-4小時之後，直接取菌液作為template進行菌液PCR檢測。要注意的一點是，
循環數不要超過25個，一般20個左右就足夠了，否則很容易出現假陽性。
建議你先挑個10-20個，一般肯定有了。菌液PCR比較方便，但之後還需要將陽性克隆
擴增起來抽質粒（酉每）切鑒定。50bp的切出來會看不到了，你可以選其他（酉每）
切出包含insert，但又比insert大一些的片斷，通過與空載體切出的片斷大小相比
來判斷是不是陽性克隆
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02/14 23:45, , 1F
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