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[ Biotech ]
討論串[求救] his-tag純化蛋白
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剛開始你的確是試了一些純化條件，而無法解決問題. 這時候，你要跳脫原先的思維，不然就被框架限制了. 兩個問題,. 1. 你的target protein 是否有在純化或是表現中降解？或是aggregated?. 如果是這種情況發生的話，因為這些protein 可能都帶有his tag. 你怎麼調整
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不完全相關,. 小弟最近也在做protein expression,. 多看了很多文獻有發現一些很奇妙的變因：. 假設菌跟plasmid都對的話,. 首先[IPTG]的範圍大概會從0.01mM~1mM都有可能是有效範圍. 我之前的protein在0.05mM的時候表現得最好. 再來OD. 建議做小規
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謝謝大大們的建議，我已經開始進行有無induction的比較. 我的認知是如果要增加表現量就是增加induction時間,IPTG濃度,表現溫度. 其他條件的改變(譬如低溫長時間表現)只是要避免inclusion body的產生. 不知道這個想法是不是錯的. plasmid的序列之前已經定過所以沒問
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43. 前人種樹後人乘涼, 但是難免有種歪的時候, 導致後人被壓傷, 這在科科界時有所聞.. 另外, 操作的手法也有可能會造成差異.. https://goo.gl/zMzalH. 請看上面這張圖, 理想的induction(中文應該是誘導?),. 應該要可以達到這張圖Lane 1 2的樣子(未純化
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不常發文，排版差見諒. 小弟最近在重複學姊的實驗，用His-tag純化蛋白. 但是不管怎樣都不純，蛋白量也不多. 實驗條件是先以含有表達序列的pET28a 載體放入BL-21菌株中. 接著塗盤篩選挑菌放入含有50ug/mL的LB broth中培養16小時. 接著各加5mL的菌液到兩瓶500mL的LB
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