Re: [問題] retroviral vector..

看板Biology (生物學)作者vixen.時間20年前 (2005/11/14 07:32)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《kuuro》之銘言： > packaging cells 被 transfected retroviral vector 之後可用藥篩選, 使virus > producing cells 增加, 但是問題是那些不產生virus的細胞不是也會被感染嗎 ? > 感染之後也具有抗藥性了吧? 未被transfected成功的cell不具抗藥性. 已被transfected成功的cell在一段時間後會抵抗superinfection並產生daughter virus. daughter virus的確可以繼續感染其他未被transfected的cell. 在想會不會發生這種感染後果前, 得要先想兩個問題: 1. virus packaging signal 是vector帶來的還是cell line自帶的.(各家設計不同) 2.市面上常見的商用retrovirus系統為安全起見, 製造出來的retrovirus蠻多是具有感染力, 但無法自我複製再製造更下一代的, 全部必須元素gag/pol/ltr都到齊了嗎? (所以我們可能將不會從這些後期感染細胞上撈到更多retrovirus, 看signal在哪而定). 當然若是系統設計理念相容, stable production of retrovirus也是不錯的, 只是選出來的就是特定clone的virus, 有時會突顯genetic background, 與stable clone的問題類似. >另外先用ectotrophic packaging cell 產生的virus > 去感染 amphotrophic packaging cell 可進一步增加virus titre, 我沒有這樣做過, 是否可以請您比較一下用同樣cell line的放大效果? recombinant virus太複雜的話, 也無法無限制的永遠放大下去, 應該不會有人用個P20的virus吧? :) >為何一定要先 > 用ectotrophic 呢? ^^^^^^^^^^^^^^^安全性問題與試劑用量最小化嗎? >amphotrophic 和 ectotrophic 的不同不是只在於env嗎? 的確可以做到只有此點不同. (env或對應receptor/ligand的組合) 其他問題可以參考Clontecl的Retroviral Gene Transfer and Expression User Manual http://www.clontech.com/clontech/techinfo/manuals/PDF/PT3132-1.pdf -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ◢　◤ ★ 線上音樂新震撼 ★ ◢　◤ │ bbs.kkcity.com.tw │ ^_^ / 隨選隨播免等待 KKBOX◤ ^_^ / └──《From: 》──┘ 　 ◤ http://www.kkbox.com.tw 　 ◤ --