為什麼用PCR產物當作template的效果反而會比holo genome的差呢?

看板Biology (生物學)作者時間20年前 (2006/01/22 16:01), 編輯推噓1(100)
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從BAC(~200KB)要p出1000bp的產物,有些困難, 有時BAC斷裂,會得到較短的產物 在四次實驗裡,有兩次會p不出東西來, 所以我想,用已得到的產物當作template再p,應該會比較容易吧! 可是,我把PCR產物經過電泳回收純化過後,也跑膠確定只有一條band, 拿來當作template,結果卻得到很少量的產物,而且,膠上也呈見smeal的狀況, 為什麼會這樣呢? 是PCR本身限制,還是電泳回收純化的方法不夠純呢? 事實上,每次我用小片斷的DNA當作template,作pcr,效果都不是很好。 我用的polymerase是生工代理的Pfu. -- 面對現實的人生 以生命樹作我們的食物 以親愛的聖徒為我們的伙伴 以有限換取永遠 -- ※ Origin: 楓橋驛站<bbs.cs.nthu.edu.tw> ◆ From: H-195-176.RAS.NCTU.edu.tw

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最好不要用PCR產物再進行擴增,如果不得已,請用nest PCR
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文章代碼(AID): #13qpl000 (Biology)
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