Re: [問題] 關於抽好的genomic DNA含有多醣雜質~

看板Biology (生物學)作者vixen.時間20年前 (2006/04/07 02:01)推噓0(0推 0噓 0→)

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你是抽植物的DNA嗎? 怎麼會用CTAB啊? CTAB溶液中, 高鹽分(>0.7M)是去除多醣的關鍵另外檢查一下你的CTAB, 配置5%溶液前, 把它加熱到室溫, 以避免沉澱. 還有, 你可以在萃取前多加一步清洗手續, 看看以下這個連結跟裡面的PDF步驟. http://pubs.nrc-cnrc.gc.ca/ispmb/r04-043.html 這份步驟裡, PVP是隨著清洗液倒掉的. Good luck! > 作者: roundball (飛) 看板: biology > 請問各位先進, > 我抽好的genomic DNA純度都有1.5, > (OD. 260 / OD. 280的比值) > 但是殘留的多醣跟二次代謝物比DNA的濃度還高, > (我的研究材料本身有黏稠的汁液) > 大約是DNA濃度的1.1到1.9倍, > 有什麼方法可以把這些抽好的DNA所含的多醣, > 能夠再去除一部分呢? > 由於實驗室的藥品或設備不是很齊全, > 希望能夠有簡易的方法來完成再次純化, > -- 推 vixen：怎麼抽的講一下, 比較好給建議 [04/06] → roundball：我用5%的CTAB,其他的tris,EDTA,NaCl,2-mercaptoethanol [04/06] → roundball：都差不多是常見方法的濃度,也加了20%的SDS打破細胞~ [04/06] → roundball：然後水浴加熱75度至少40分鐘,隨後過二次氯仿,留下水層~ [04/06] → roundball：加入5M的NaCl,體積為水層的0.5倍,與isopropanol等體積~ [04/06] → roundball：overnight沉澱,離心,75%酒精洗一下pellet,乾燥一小時~ [04/06] → roundball：加TE buffer回溶,加RNase乾浴37度半小時~ [04/06] → roundball：然後phenol+氯仿(1:1)先除蛋白,低溫離心取水層~ [04/06] → roundball：水層再加一次等體積的氯仿,乳化->離心->取水層~ [04/06] → roundball：接著加NaOAc跟isopropanol沉澱,pellet用75%酒精洗一洗~ [04/06] → roundball：這樣說明可以嗎?我忘了說有加PVP-40到萃取buffer除多醣~ [04/06] -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ◢　◤ 找歌最方便 KKBOX 歌詞搜尋!! │ bbs.kkcity.com.tw │ \^_^ / ★http://www.kkbox.com.tw★ └──《From:143.48.8.154 》──┘ 　 ◤ 唱片公司授權，音樂盡情下載 --