Re: 關於transfection
※ 引述《sisco@kkcity.com.tw ( )》之銘言：
> 要不要測測看mycoplasma
> 若是污染了...有時候會影響transfection的efficicncy
> 或是target protein的表現.....
> ※ 引述《ccjolin.bbs@bbs.badcow.com.tw (我也很盡心)》之銘言：
> > 目前我利用H1299這株細胞株作Transfection一直有問題，
> > 基本上這個細胞很容易作，
> > 但是internal control一直控制不好(用的是Renilla)，
> > 我絕得應該是分細胞的時候分不太好啦(種在24well中)，
> > 但是我已經將細胞在分之前打的很均勻了，
> > 還是說作transfection還要注意哪些嗎?
> > 真的漫急的，因為lipo很貴，
> > 老師好像有點.......= =
> > 希望有經驗的同學可以幫忙指教一下，感謝囉!
Reporter assay的主要誤差可分為兩個,所以才需要internal control看客觀性
1. Individual transfection effeciency
此時從duplicate well讀值可以看出
2. Total subjected cell number
用個house-keeping cellular protein當control就可以觀察
我懷疑你Renilla的promoter是不是受到你的處理影響?
收luciferase剩下的細胞定個蛋白濃度跑個western看看
用beta-actin or GAPDH當internal control
雖然你的問題還不夠明確,但我覺得你的問題大概不在於transfection本身。
參考看看囉~ (我現在常用GFP當tranfection internal control)
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→↓ Origin: 東海生物˙木棉樹 bbs.bio.thu.edu.tw
↑← Author: olin 從 211.76.173.108 發表
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