Re: 能否更改誘導及培養條件,讓inclusion body的情 …
※ 引述《raiken.bbs@ptt.cc (raiken)》之銘言：
> ※ 引述《wuko.bbs@bbs.nsysu.edu.tw ()》之銘言：
> : 小弟我利用E. coli表現含His tag的蛋白質,
> : 經過破菌及離心後發現,
> : 我的蛋白質在inclusion body裡面,
> : 我有用8 M urea去溶inclusion body,
> : 但是還是renature不回來,
> : 透析後,還是會沈澱！
> : 所以想要請問一下大大,
> : 能否更改誘導及培養條件,讓inclusion body的情況改善?
> 如果只改變induction條件的話,一般就是測37度3小時或20度20小時
> 再不然就是在放大完後,先冰一下做cold shake再去induction
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這個方式還真的是第一次聽到耶..
> 或許有機會可以改善
基本上會變成inclusion body主要的原因
好像是因為重組蛋白質可能對細菌本身有害
可以試著不要讓它表現量那麼高就有可能可以改善inclusion body的情形
試試看把inducer的量降低 或者培育的溫度降低
時間夠多的話就換一下vector
pET system裡面有一些vector帶有signal peptide
可以把蛋白質分泌到paripalsmic space
這樣有機會可以解決inclusion body的問題
不過還是要看蛋白質啦 不見得每種蛋白質都可以分泌出去的
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