Re: [問題] 藍白菌篩選
※ 引述《phcwc (呆呆)》之銘言：
【問題】：藍白菌篩選挑出有重組DNA的轉型細菌
【問題起因】：我做出來的結果是一刻都沒長,連藍菌都沒有
想知道有哪些原因會造成這種結果
【個人看法】：想說可能是plasmid不夠,或是操作中的人為疏失
想知道說是不是還有其他的可能
我這次用的plasmid是pGEMT和pGEMT-PCR
藉由pGEMT上的lacZ來表現出藍白菌
希望各位可以幫我解答
謝謝^^
推
03/26 00:42,
03/26 00:42
→
03/26 00:45,
03/26 00:45
推
03/26 01:04,
03/26 01:04
→
03/26 01:36,
03/26 01:36
那就從ligation開始討論吧。
問題1：接入的DNA序列是實驗室有人做過的，還是新的？
問題2：如果是新的，有送定序吧？(前後接頭的序列對嗎？)
問題3：如果定序沒錯，可以檢查/調整一下ligation的條件(溫度、時間、濃度.....)
然後用原批菌做transformation試試看。
問題4：這批菌是否像dankai所說活力降低？如果要換菌做，可和上面平行做一批，
如果確定是菌的問題，剛好可以把該批菌銷毀。
問題5：transformation的常見操作問題，送入competent cell過程太粗暴，
塗菌時過火消毒的塗菌棒溫度太高，培養基的抗生素選錯.....
我想到這些可能的問題。
--
█◢◣◣ ● ◢█◢█ ● ◢██◣
████ ▅◣ ███◤ ▅◣ █◤◢█ ◢██◣ ◢██◣ ◢◣◢◣
████ ██ ███◣ ██ █◢██ ███◤ ██ █ ████
◥◤◥◤ █◤ ◥█◥◤ █◤ ◥█◤◤ ★ ███◢ ██◣█ ████
http://tinyurl.com/2dvp94 ◥██◤ ◥██◤ █◥◤◥
歡迎免費申請Ｗiki站
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.217.110.171
推
03/26 08:52, , 1F
03/26 08:52, 1F
討論串 (同標題文章)
Biology 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
18
34
-2
10
-7
13