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[問題]關於cloning設計primer

看板Biology (生物學)作者 (a1217)時間14年前 (2011/06/11 13:49), 編輯推噓4(4推 0噓 15→)
留言19則, 4人參與, 最新討論串1/1
【問題】： cloning時，primer的設計.... 【問題起因】： template為cDNA, 設計primer時，通常是直接去看某基因的coding region, forward照抄前幾個nucleotide,reverse是倒著寫＆互補。 【個人看法】： 從ncbi裡面nucleotide coding region去查他給的序列atg....(這是代表mRNA) 所以轉完RT的cDNA序列應該是tac..... 所以設計的forward應該是黏到template(cDNA)上，先做一段，然後reverse再黏到forward 做出來的DNA上 ------------------------------------------------------------------ 但我聽到別人的說法是reverse primer會先bind到cDNA template上？ 請問我是不是哪裡想錯了？？ 【參考資料/連結】： N/A -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 112.105.66.22
推
06/11 18:26, , 1F
不懂 cDNA不是dsDNA嗎 reverse才是3'倒回來吧
06/11 18:26, 1F
→
06/11 18:28, , 2F
你分生基本功要加強了...
06/11 18:28, 2F
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06/11 18:31, , 3F
我想你誤會了 reverse得確是3'到著互補寫回來
06/11 18:31, 3F
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06/11 18:31, , 4F
也許是我文中沒寫清楚
06/11 18:31, 4F
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06/11 18:32, , 5F
至於cDNA應該是雙股 但一股是RNA another is DNA, not dsDNA
06/11 18:32, 5F
推
06/11 20:29, , 6F
恩 是ssDNA我記錯 這樣的話R primer就是bind到新合成的
06/11 20:29, 6F
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06/11 20:30, , 7F
你應該是對的 F R兩條不會在同一條單股上
06/11 20:30, 7F
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06/11 21:10, , 8F
別人應該是把rt搞錯了吧 reverse先貼mRNA
06/11 21:10, 8F
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06/11 21:16, , 9F
樓上指的應該是RT primer oligodT之類的吧
06/11 21:16, 9F
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06/11 21:17, , 10F
原PO說的應該是PCR的primer了吧 我沒搞錯的話
06/11 21:17, 10F
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06/11 23:30, , 11F
RT可以用specific primer
06/11 23:30, 11F
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06/11 23:44, , 12F
RT的確可以用GSP，一般多是reverse primer。
06/11 23:44, 12F
推
06/12 03:41, , 13F
可以用specific primer沒錯 不過我沒用過
06/12 03:41, 13F
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06/12 09:44, , 14F
用dT都全部clone的出來 樓上生活真是順利阿(菸)
06/12 09:44, 14F
推
06/12 17:56, , 15F
好說好說 (菸) 可以卡關的東西太多了 不差這個 QQ
06/12 17:56, 15F
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06/14 12:20, , 16F
我比較好奇的是有人RT用gene specific primer時是用RNA
06/14 12:20, 16F
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06/14 12:21, , 17F
primer嗎？我自己都是用一般的DNA primer，之後的PCR還
06/14 12:21, 17F
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06/14 12:21, , 18F
可以繼續用。
06/14 12:21, 18F
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06/14 18:39, , 19F
本來就是用DNA阿 dT也是DNA
06/14 18:39, 19F
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