[問題] RT-PCR primer 不能用

看板Biology (生物學)作者 (烏龜涵)時間12年前 (2013/05/09 17:06), 編輯推噓2(202)
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【問題】 我設計了一對primer想用來偵測mRNA的量 片段位於Exon上,大小約75bps, 收到primer後有用genomic DNA做為template去跑PCR, 跑膠結果是Single band,且大小符合, 於是就用RT PCR後的cDNA做為template去跑PCR, 跑膠結果卻是2條band且都大於100bps, 有跑RNA膠也有跑-RT(有MMLV不加RNA)確認無DNA汙染 不知道為什麼會這樣? (PCR藥品條件都一樣,elongation時間為10秒) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.61.141

05/09 22:27, , 1F
你用的sample確定positive? primer設計有跨exon嗎?
05/09 22:27, 1F

05/09 22:28, , 2F
可上網用primer blast去確認你使用的primer是否有可能會P到
05/09 22:28, 2F

05/09 22:29, , 3F
其他不是你的target gene的cDNA
05/09 22:29, 3F

05/22 07:00, , 4F
恭喜妳拉!!!! 就是這個sample 不表現這個基因阿~!
05/22 07:00, 4F
文章代碼(AID): #1HYsR_-A (Biology)
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