Re: [問題] 關於分生的一些很基礎問題

看板Biology (生物學)作者boblu (六百)時間8年前 (2016/11/24 02:29)推噓1(1推 0噓 1→)

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建議妥善斷行以免造成回文困擾 ※ 引述《shen199403 (shen)》之銘言： : 有些很基本的問題想要詢問, : 因為今天來不及問人， : 希望高手可以幫忙解答釐清觀念>< : (1)primer是用來讓DNA進行複製的？不知道這觀念有沒有錯.... : 它是一小段DNA的序列,那不是得要先知道欲複製的DNA的序列 : 才能知道primer要用甚麼嗎？基本上對有些狀況下會用 random primer : 例如想要找出微生物是否具有固氮基因,就要用可以辨識出nif H的primer去進行分析， : 那為什麼學長姐都說要用甚麼1F,9R,27F...等等的去跑PCR@@ 這跟你上面的問題不衝突啊你知道這些 XXF XXR 是甚麼嗎？你怎麼確定他不是針對固氮基因的序列設計的 primer 的代號？不過其實我猜真的不是這些 primer 指的應該是 16s rRNA 基因 (16s rDNA) 的通用 primer 這是跨許多原核生物物種間高度保守的序列但因為又含有高變異區所以 16s rDNA 適合作為菌種鑑定之用 : (2)為什麼都說是跑16s r DNA定序？ ... 因為真的是在給 16s rDNA 定序？（廢話）如果你想問的是 16s rDNA 定序的目的為何就真的要問你們實驗室的人不過一般來說 16s rDNA 定序是用來做菌種鑑定所以如果你問的問題的意思是是說為什麼實驗室要判斷某細菌是否有固氮基因的方法是做 16s rDNA 定序其實我不知道我不是搞微生物的但推測實際上做的可能是根據 16s rDNA 序列鑑定其是否為已知有固氮基因的菌種 : 以及不是在跑PCR的時候已經加入primer了嗎？ : 那為什麼在定序時還要再用primer?(就是在填單時候廠商要求輸入的欲使用引子) 定序時是拿一點你的 PCR 產物去當 template 裡面不會有適量足量的 primer 而且假設你因為某種神祕不可解的原因在一開始的 PCR 中加入了極超量的 primer pair 而且 PCR 還因為某種神祕不可解的原因做得出來你要拿這種 PCR 產物去不再加 primer 定序也還是定不出來因為你現在裡面有兩種 primer, 但定序只要一端好啦理論上你或許可以在 PCR 的時候加入單邊超量的 primer 然後奇蹟似的 PCR 做得出來然後直接拿 PCR 產物不再加 primer 去定序試試看 ...證明這樣真的定得出來說不定可以得個搞笑諾貝爾 ...不過錢請從自己口袋出。計畫經費都是民脂民膏請愛惜使用 : 不知道表達有沒有清楚麻煩解惑了謝謝>< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 198.137.20.209 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biology/M.1479925752.A.C44.html ※ 編輯: boblu (198.137.20.209), 11/24/2016 03:02:05