Re: 如果送入的plasmid會造成E coli的死亡
※ 引述《cktto.bbs@bbs.cs.nthu.edu.tw (論文超難寫)》之銘言：
> 我將我想表現蛋白質的DNA接入expression vector
> 送入E coli中
> 發現根本挑不到我想要的plasmid
> 整個plate中會長出來的盡是些雜菌
> 同樣狀況下的ligation,transform
> 不同的DNA plasmid早已被我接出了
> 這情形大約快半年
> 我使用的expression vector有pET30, pTrc99, pGEX5X-1
> E coli則有DH5(alpha), XL1Blue, BL21(DE3)
> 都試過但卻沒一個接出 > <
> 假設我的技術沒問題下
> 我還有什麼方法可以得到可以表現此DNA的clone呢??
> 比如說換什麼vector或著E coli等等....
> 有建議就提出來囉
> 謝謝!!
1. Plate上有雜菌應該是抗生素加的量不夠,或是養太久讓抗生素失效了...
2. 若考慮是不是ligation的問題,可以做ligation check,拿個vector 和insert primer
跑個PCR就知道了..
3. 如果ligation check沒問題,可能是competent cell的efficiency不好..
可以再重做competent cell(test efficiency=>1ng DNA 10乘以5次方顆菌以上)
4. 要不然就可能是技術上操作的問題了...Good luck !!!
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