Re: 請問如何收細胞膜上的protein?
※ 引述《sirus (很自由..)》之銘言：
: 我的實驗因為要看一種receptor蛋白質表現
: 那是不是要收細胞膜上的蛋白質才行
: 可是如果用一般收total protein的方法
: 可能會把膜都破壞掉了.....收到的蛋白質就會很少了
: 所以想請問有沒有人收過細胞膜的protein
: 該怎麼做會比較好呢??
超高速離心阿
分離細胞上不同的胞器
再用相對對照各胞器的抗體
比如說你怎知到你的蛋白質是在膜上
你把經過超高速離心後各個 fraction 拿去跑電泳作 western
一般市面上有賣很多物種的 ATPase 的抗體
如果你的蛋白質與 ATPase 出現在同一個分劃
就能代表你是膜蛋白
當然實際這實驗要作很多conform
沒這麼單純
參考一下這篇
Chen, Y.F., Randlett, M.D., Jennifer, L.F., and Schaller, G.E.
(2002) Localization of the Ethylene Receptor ETR1 to the Endoplasmic
Reticulum of Arabidopsis Journal of biological chemistry
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