Re: [問題] 請問 衛星現象
※ 引述《tracy9102 (舞飛櫻)》之銘言：
: ※ 引述《spye (可愛ㄉ維尼)》之銘言：
: : 養菌出現的衛星現象
: : 有誰知道詳細滴原理嗎?
: : 只大概知道跟LB plate沒有泡好有關...
你是說 Satellite colony 嗎?..
那就是抗生素加的不夠 或者是 plate 放太久了
或者是當初加抗生素時根本沒混均勻
將重組 DNA transform 到competent cell 後
有轉入目標基因的 因帶有抗 antibiotic 的 gene
故會生長
但注意 這不代表其他沒轉進目標基因菌都死了
這些很多只是以休眠狀態存在著
以 Amp 這個常用的 antibiotic 來說...
一般市面上的 vector 抗 Amp gene,
其 vector 上會轉譯出一個酵素可以降解 Amp 的
而這個酵素室外泌酵素 也就是說他會使附近的 Amp 逐漸 degrade..
當附近 medium 的 Amp 被降解後 當初在旁邊休眠的菌 因為沒有了
抗生素的抑制 便開始生長
所以如果是 LB/Amp plate, 放的太久後 目標的 cell 旁邊就會逐漸的長出
衛星菌落 原因即是如此
但是一般而言 Kan 這種 antibiotic 就比較不會有這種問題
因為 vector 抗 Kan 的機制並非是透過 vector 本身轉譯出分解
antibiotic 的外泌酵素, 而是藉由 metabolism 的改變來避開
Kan 的抑制, 故以 Kan 當成抗生素比較不會有這種情況
這種機制作cloning 應該都很清楚 否則再操作更進一步分生實驗的時候
會產生問題 卻不知問題在哪
比如在表現蛋白質的時候 就會遇到表現不出來的情況
: 以我的實驗來說
: 我養的菌若是經過重組後
: 塗於IPTG和X-GAL的LB PLATE上(藍白篩)
: 如果出現這種現象
: 是因為你當初重組時的vecter insert DNA
: 其中一個或二個處理的不夠乾淨
: DNA中含有太多雜質或蛋白質....等
: 就會有這種情況
: 要解決也滿容易的
: 就多洗幾次~離心的轉速高一些
: (G力要夠 放去大台一點的離心機去離)
: 最後酒精洗的時候記得一定要完全乾了才溶於水
: 這樣的話
: 衛星現象會改善非常多
: 給你參考 ^^
: 如有錯誤 請指正
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