[問題] 有關於抽質體DNA的問題

看板Biotech (生命科學)作者hchs890843 (紫魚)時間20年前 (2005/04/12 15:27)推噓1(1推 0噓 1→)

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我現在在實驗室打工，然後會常常碰到要幫學長姐抽質體DNA的工作一般的菌還好，可是每次我遇到一種叫VSVG的質體就完了產率相當的低，每次可能都要多弄好幾罐才能抽夠我現在是在作大量質體的製備，利用廠商設計好的工具說明來抽。現在就我所學的，想到的只有一些原因本身質體就很不容易被transformation到大腸桿菌裡，因為比較大本身VSVG的copy number數低(這是實驗室的學長姐跟我說的) 想找尋一些對付這種low copy的質體DNA，我把一些學長姐提供的意見與自己的愚笨想法一起貼上來，希望大家能給點意見討論討論>"< 學長姐的建議： ‧多養一些菌，在lysis buffer裡面放比較久一點 ‧盡可能的小心.... ‧如果覺得很煩那就retransformation囉！因為可能當時的competent cell不夠好 ‧抽dna加isopropanol後，丟到-80 o/n，第二天再去抽我的一些想法： ‧把菌養久一點，例如說我今天養500ml的菌，10小時後去抽。那我把養的時間加長變成18或24小時之後再去抽，會不會比較好？或會更糟？通常大家對這些細菌大約都養多久，或去測OD600時大約在多少左右是一個可能得到較多的量？我其實很擔心這樣菌會不會活太老然後就像做competent cell一樣失敗 ‧不用過column的技術，用傳統的酒精沉澱法去做，據說這樣可能盡可能的減低DNA黏在column上的機會。不過這個傳統技術有什麼先天限制嗎？ ‧用更高的轉速轉DNA：這有用嗎？我是以抽病毒的方法去想的，想把病毒弄下來就是要轉快一點... 我觀察一些菌的生長情形，像我們養的VSVG跟其他比較high copy的菌，總覺得它雖然用同樣的時間去養，可是就是感覺混濁度就比其他的菌低一些，有時還覺得它好像都沒長一樣，跟昨天放下去的LB顏色差不多XD ↑有時候上面的天馬行空版思考學長姐都覺得不太可能，可是...還是來問一下大概就是這樣了....板上的前輩謝謝你們看文章如果前輩覺得這些資訊是可以自修被查到的那可否提供大概的方向，要往哪裡去找會比較好我想我可以去看看，然後再把不懂的東西提出總之謝謝各位 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.87.1 ※ 編輯: hchs890843 來自: 203.71.87.1 (04/12 23:57) ※ 編輯: hchs890843 來自: 203.71.87.1 (04/13 01:04)