[問題] Ligation失敗(已看過精華區)
請問各位高手
小弟現在要將3kb的PCR product接到一6.4kb的vector的Bgl II上
我先PCR amplify我的fragment
純化後用Bgl II切再gel purify以去除nonspecific products
至於vector, 我用Bgl II 切完純化後用CIAP做dephosphorylation
Ligation的時候insert:vector大約維持在5:1的比例
14 C overnight之後 transform到DH5alpha competent cells
奇怪的是,我的control(無insert)沒有任何colony
有insert的ligation 做transformation出來所得的clone全是self-ligation
我實在無法解釋這個結果,難道insert會促進self-ligation嗎
clone這個fragment好幾個月了都沒什麼進展,拜託各位幫忙了
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