請問大片段的RT-PCR
請問一下 最近想釣幾個基因出來作表現
3個基因PCR出來的片段大小約為1.5 kb
本來用construct的primer去夾 沒夾到(位置不對，差太多)
後來再往外設計primer想做nested PCR
怪的是...那個位置也沒有我想要的band!
這....看了一下他們序列，發現GC比例還不少
明天會加DMSO或formamide試試看..............
想請教大家，有沒有什麼原因會導致PCR沒有產物?
(是primer dimer的原因嗎?發現我的primer dimer似乎還不少)
以下是我的條件
95度 30s
60度 30s
72度 100s
35 cycle
p.s
1.cDNA quality不好的原因已去除，因為這是別人給我的cDNA
他已經檢查過了
2.我非常確定這個細胞有表現這幾個基因
唉 第一次做RT-PCR感受到這麼強大的無力感
難怪有人說RT-PCR是最困難的技術，因為他太簡單了
簡單到發生問題不知道問題出在哪
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