Re: [問題] 請問western blot抗體是否能夠再使用？
看板Biotech (生命科學)作者linzhengzhan (研究所：碩士班vs博士班)時間19年前 (2006/06/09 06:32)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串3/4 (看更多)
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: ※ 引述《ginmol.bbs@ptt.cc (儲備博士)》之銘言：
: > 因為老闆一直吵著實驗很浪費...要我盡可能減少抗體使用量，
: > 或是重複使用一級與二級抗體；但是我之前曾嘗試過，
: > 發現有的一級抗體根本無法重複使用...想請教各位，
: > 是不是有更好的稀釋溶液還是理想的儲存方法，
: > 可以讓抗體重複在western中使用？感激......
: 的確是 case by case 吧
: 基本上 一抗用 5% NGS + 3% BSA + 0.?% tween 20 + 0.0?% Azide
: 可以就是可以 不行就...
: 二抗基本上是不推薦重複用
: 要省二抗 可以考慮改用比較敏感的發光劑
: 另外我記得 labvision 有出一種抗體的稀釋液
: 號稱稀釋到 working 濃度的抗體可以室溫保存數個月
: 價錢也不貴
之前，實驗室老闆跟原先的博班老闆A primary antibody，因為少，所以reuse，
原來保存在PBST (或是TBST)中；之後在Hybird 1°b.時，就出現了一些不該有的pattern
。(事實上，之前在用其他的1°Ab.，不會有這種情況)
之後，保存在Blocking solution (1% BSA in 1X PBS, contain 0.2% sodium
azoid)，就不會有這種情況了。只是這樣子，感覺上比較浪費，但是可以一直重覆使用，
到Ab.的titer沒有為止……
(這是老闆說的，我到目前為止還沒有用到titer沒有的情況！)
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Blocking solution，BSA vs. non-fat milk
BSA win！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.139.132
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