Re: [問題] 想請問關於培養Jurkat cell line的問題

看板Biotech (生命科學)作者CD3 (tot)時間19年前 (2006/07/09 17:25)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《jsi (jsi)》之銘言： : ※ 引述《CD3 (tot)》之銘言： : : 這次還是老樣子 culture到第三代的時候 : : 細胞又開始死亡 : : 前天看到的細胞還蠻健康的突然間數目就遽減 : : 我真的覺得好挫折希望有類似經驗的人能夠提供一些意見給我 : : 謝謝!! : 不知道你說的medium和PBS沒問題是如何測試的 : 我想你可以請學長幫你配一罐medium及PBS來養養看 : 把你配的medium及PBS拿給學長養養看檢測是否問題出於此 : btw,你應該是用RPMI泡medium吧? 這個方法學長已經試過了所以現在我在culture Jurkat的時候我的RPMI都是和學長拿的但是DPBS是我自己配的不過DPBS用到現在也快一學期了我是有懷疑過DPBS 但是一直養到第三代才出事似乎也不太合理 : 此外你提到曾經將細胞穩定培養一個月那差不多可繼代十代 : 是否這個月跟其他時候培養上有任何差異? : 繼代時有無使用過火過的玻璃PIPET 是否因為過火太久導致溫度過高使細胞死亡? : 繼代打散細胞時是否有打出很多泡泡? 太多泡泡對細胞而言並非好事 : flask放到incubator中有無旋開蓋子? : 大約多久繼代一次? 是否放太久是細胞不健康? 我是用plate養細胞一次大概放2乘10的六次吧 medium則是放10ml左右每兩天culture一次養最長的那一次剛好是學長要出國所以先將Medium分給我我就按照之前的步驟來養也沒有什麼和之前不一樣的地方 : 我想繼代jurkat時應該是不會用到trypsin 所以可能不是這方面的問題 : 不過還是順帶一提配置trypsin時需用等張溶液稀釋而不是用水 : 若用水稀釋之trypsin來處理細胞則細胞會長得很不好 : 我在培養JURKAT CELL時通常都養在細胞數很少的狀況下 : 而我老闆則喜歡養在細胞數很多的狀況下細胞都長得不錯 : 所以你可以每天觀察細胞數是細胞因為死亡減少了或者細胞只是長得比較慢? : 不知道你是否還有培養其他細胞? 觀察到的細胞大多已經是破裂的細胞我曾經將那些細胞重新resuspend再養一次雖然細胞有再養起來但是學長說那些型態已經有些改變了我自己倒是覺得還好啦也許我該用flow來看看細胞是不是真的已經有所改變呢? 真的很謝謝你! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.112.41.67