[問題] 跪求silver stain染不起來的問題(補述)

看板Biotech (生命科學)作者NightAmades (夜)時間19年前 (2006/08/28 21:08)推噓4(4推 0噓 3→)

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我的protocol如下 1. Fix 50% MeOH, 12% AcOH add 0.154ml 24% H2CO/200mL in hood incubate for more than 1 hour to overnight 2. Wash 50% MeOH Wash 3X 20 minutes 3. Pretreat 0.02% Na2S2O3 thiosulfate solutions should be prepared fresh, save some for step 7. Incubate 1 minute exactly. 4.Rinse ddH2O 3 times 20 seconds 5. Impregnate 0.2% AgNO3 Dilute 2 ml of 20% stock to 200ml, and add 0.231ml 24% H2CO Incubate for 20 minutes, DON'T TOUCH GEL!! 6. Rinse ddH2O 2 times 30 seconds 7. Develop 6% Na2CO3 (200ml) add 0.154 ml 24% H2CO and 4 ml of 0.02% Na2S2O3 Incubate for 10 minutes 這幾天我一直試者找出原因... 再過程中也發生一些奇奇怪怪的事情... 首先在某一次...我染成功了!! 而那次我回想與之前有哪些地方不同.. 唯一不同的是..我跑SDS-PAGE時用的running buffer不大一樣... 先前我run SDS的內槽用每次需新配的10X->1Xbuffer 而外槽用used buffer! 由於之前學長都是全用新的... 想說由此推測可能是這方面有問題.... 而再下一次...我染的的時候...發生奇怪事情! 就是我染的第一片可以染...可是大概相距約一小時左右染第二片卻染不起來.. 而這兩片在跑電泳的buffer不一樣!一個是用確定以前使buffer可以染的.. 一個是新配的10X(因為10X用完)dillute成1X~ 而由此兩次結果我就推測那應該是跑電泳的buffer問題! 因為這次我使用的是兩種同樣試劑和方法!! but............ 再隔天...我跟學長再做一次染色... 學長的gel是確定可以染的時候用的電泳buffer! 而我故意繼續使用我新配的..來跑電泳來染色(想說推測應該是buffer問題) 可是呢...結果竟然我的跟學長的gel都染不起來!! 而當日我再用BSA去跑電泳(buffer依然是我自己那罐新配的)去染色! 結果雖然有一點band出來...但是很淡...算是視同失敗...!! 以這情況來看...好像又不是buffer問題才對... 而且以常理來看buffer應該不會影響才對..!! 可是如果推敲是試劑問題... 那之前所發生的"第一片可以染..第二片不能染"的狀況又不知道做何解釋....... 而如果是試劑問題....我這種情況不知道是哪種世紀出問題的可能性比較大? 現在找資料...大家遇到的問題通常都是background染太深的問題.. 好像幾乎沒看到像我這樣連染都染不到.. background都沒有...就跟剛跑完SDS-PAGE一樣透明...... 唉~好難搞~ 這次我把問題PO仔細點.... 希望大家甚至有高手可以幫我想想解決~~~~>"< 感激不盡!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.160.142