Re: [問題] Liposome 跟 電穿孔送質體至哺乳動物細 …
※ 引述《llorraine (心中的少年韓波)》之銘言：
: 我學姊兩種方法都用過 目前偏好使用liposome
: 不只效率高 操作過程也方便快速
: 電擊法對細胞的傷害性很大 通常做完會損失一半的細胞
: 且步驟比較繁複 需要的細胞量也比較多(因要克服死亡率)
: 以上經驗主要來自HEK293與常見的liver cell line
liver cell?HepG2嗎
請問你用什麼方法transfection?
謝嚕
: ※ 引述《datro (事在人為，非環境為)》之銘言：
: : 今天meeting的時候，
: : 跟老闆談到這liposome跟eletroporesis兩種方法的效率問題
: : 在in vitro的情況對於貼附細胞的處理。
: : 老闆說他聽到的是電的效率好，但是因為機器本身的購置成本貴，
: : 所以大家普遍採用Liposome來送plasmid。
: : 但是我看到的文獻跟同學間互相打聽的情況，
: : Liposome的效率反而多在50%以上，甚至有到80~90%。
: : 而且細胞毒性的問題在某些廠商的DM上也說了有效的降低。
: : 同學們的實驗室也普遍用Liposome在送plasmid。
: : 而從X Cell的操作手冊上回去找referenece，
: : 看到的效率並未如liposome一樣好。
: : 雖然在細胞膜上打洞使螢光微粒進入細胞的效率也不低，
: : 但是plasmid gene的表現量卻..........cuvette的價錢也.......50個/8.7k....
: : 其他實驗室的學姊電HL-60的效率也在兩三成上下。
: : 我們實驗室兩者都還沒做過，都想要嘗試看看(事關我的畢業...已經延了XD)
: : 想請教版上的各位先進幾個問題，
: : 對於表現plsmid的效率，在各位的操作經驗裡究竟哪一種方法效果比較好？
: : 我是比較偏愛Liposome啦！因為我覺得電的效果跟對細胞的傷害實在是.......
: : 這樣又有另外的問題了，與liposome相比電穿孔法的又有何優點？
: : 我有找到一些資料但是可能還是不夠完備。
: : 對於一些特殊的細胞或是linear plasmid的效率比較高，
: : 如：dendritic cell / Embryonic Stem Cell
: : 是否電的比較容易發生homologous recombination? 所以比較容易形成Stable clone?
: : in vivo的情況，電也會促使plasmid表現，增加DNA vaccine的活性。(近期都偏重這裡)
: : 除此之外，電穿孔法還有其他優點嗎？
: : 以上疑問還懇請版上各位先進能幫忙解答，謝謝。
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