[問題] 有關protein expression vector (pET series)

看板Biotech (生命科學)作者時間19年前 (2006/12/05 00:43), 編輯推噓1(103)
留言4則, 2人參與, 最新討論串1/1
大家好... 最近在做cloning的時候不是很順... vector:pET-21b 好不容易ligation-transformation後長出colony 但是搖5ml菌液抽plasmid結果確是空的... 不知道大家有沒有類似的經驗.... 有可能是大部分的能量都拿去做蛋白了...質體複製的少... 不過我有去測濃度...每ul還有20ng...這就蠻怪的... 想請教大家..在做這些蛋白表現的construction有什麼要特別注意的... 謝謝大家囉 ^_^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.115.150.180

12/05 13:34, , 1F
pET system是需要 IPTG induce才會生產 Protein
12/05 13:34, 1F

12/05 13:35, , 2F
你抽不出來應該跟作蛋白無關
12/05 13:35, 2F

12/05 19:58, , 3F
你transform完有先跑colony PCR嗎?
12/05 19:58, 3F

12/05 20:00, , 4F
如果沒有,建議你用sepcpfic primer跑PCR確認有沒有insert
12/05 20:00, 4F
文章代碼(AID): #15T50K7W (Biotech)
文章代碼(AID): #15T50K7W (Biotech)