Re: [問題] 請問QPCR

看板Biotech (生命科學)作者werthers6925 (...)時間19年前 (2007/01/05 13:24)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《aggaci (學鋼琴，左手怎麼那麼笨)》之銘言： : ※ 引述《gloclovlo (只想聽音樂)》之銘言： : : 想請問各位我現在做的QPCR 用的是ABI7000 SYBR GREEN : : primer設計是用ABI 的 primer express : : 可是我設定的amplicon 100 150 200 250 都找不到合適的 : 不太可能 : : 只有設定50 才找到amplicon長度為71bp的primer : 改一下參數 : 如primer的Tm值，別設那麼嚴格 : : 但amplicon太小會不會對實驗造成影響? 還是說也可以做QPCR : : 可以請各位提供意見嗎謝謝 : 是不會啦但是一但要跑膠時，太短不好看我最近也是在做Q-PCR, 我們用的機型式ABI 7900 基本上, 不太可能找不到適合primer 就像前面那一位板大說的, 也許你的的條件太過嚴苛了我設計primer的條件提供給你作一下參考: template長度輸入400bp以上 (越長, 可以搜尋的位置就會變多) primer Tm = 60度C 加減2度C primer長度 = 22mer 加減4mer PCR product長度 = 最長250bp 其他參數用設定值基本上, 軟體設計出來的不一定是最好的我們只是從軟體認為不錯的primer挑出來.... 有時, 自己還是要修改一下.... 最後, 71bp是不會有影響啦.... 唯一擔心的, 如果你的primer會形成primer dimer 那就會混淆你的結果........(因為primer dimer的位置都是在100bp以下) 所以, 我們比較不建議PCR product長度低於100bp 願你順利 BEST -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.54.2