Re: [求救] calcium phosphate transfection

看板Biotech (生命科學)作者kitiara時間19年前 (2007/01/08 01:20)推噓2(2推 0噓 0→)

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懸浮細胞不建議用Calcium Phosphate Transfection 因為顆粒會沉澱所以是貼附型的細胞效果好 Calcium Phosphate Transfection適用細胞其實不多(以下簡稱CP好了) 你可以去翻翻Current protocol 我印象中裡面寫蠻多的通常最好用的是293T細胞效率好的話我有到九成不過是GFP啦 CP的方式其實效果variation很大這不但是我的經驗也是Current protocol上寫的而且我看你的方式像是抄書上的但書上的方式其實太傳統效果不見得好反而是各實驗室改良的Mix方式效果會好很多至於勉強用在懸浮細胞上我幹過我養的細胞也是會有些貼在dish上也嘗試過去做CP transfection 當時若以293T為目標的效果可以到9成但勉強以懸浮細胞做 GFP當control沒一顆細胞是亮的後來我發現我的細胞在HBSS中培養會全部貼在dish上於是我興奮的再做CP transfection 細胞全碎除此之外我們實驗室曾拿過很多種細胞做CP transfection 校果大多沒293T好而且大部分都是很差(頂多4成) (Hela, Caski, H1299等) 不過如果你的plasmid可以用藥篩或許沒差總之不建議你試尤其是懸浮細胞效果奇差硬要試的話顆粒大小換medium的時間都可以調我加入CP plasmid Mix到細胞medium中最短一個小時就換medium(complete) 第二天效果仍有7成不過是293T就是有的細胞很脆弱兩個小時換就死光光了還有有的書上說 Serum會影響transfection效率雖然我覺得沒差最後書上都寫 Mix CaCl 和 HBS後要等幾十分鐘其實...........我做到最後的經驗是根本不用等顆粒細才是王道不過這東西真的很詭異到各個實驗室的結果都不大一樣我也有看過其他實驗室做出比我大十倍有的顆粒細胞沒死效果也很好真是天殺的不知所以然光transfection我就試了好幾個月兩年下來我對這方法還是一整個不喜歡即使在熟悉的實驗室用同樣的buffer medium 我都不能保證我每一次細胞都不會碎也許是我們的方法也不好吧只能說原po得多試多問了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.70.94.20