Re: [問題] 關於一個protein alpha-synuclein
※ 引述《allisa (小晴)》之銘言：
: 這個蛋白我做western一直都壓不出來
: 看賣抗體的網頁 也沒有他試做的片子
: 想問問 有沒有人壓出來過?
: 是不是特別難壓?
: 還是他表現量原本就很少?我的protein需要濃一點阿?
: 謝謝
我的步驟
我其他的蛋白都壓得很正常 只有這個蛋白一直壓不出來
跑膠的時候 上膠12% 下膠6%(這有點忘了) 不過都跟實驗室其他人是一樣的
110V 120min 之後transfer用400mA 65min
blocking的牛奶用1.25g泡25ml(一片膠的用量) 室溫搖一小時
一抗我是用1:1000(用PBS稀釋) 4度C overnight
之後用1X PBST洗5min*3
二抗是用0.5g泡10ml的牛奶加4ul抗體(抗體原液先用甘油1:1稀釋抗凍過)
搖一個小時 室溫下 之後用1X PBST洗5min*3 + 10min*3
接著使用ECL壓片
大致上的步驟是這樣 謝謝
然後說明一下壓不出來的情形
是整張membrane壓出來都很空白
只有在分子量很大的地方 大約50~60有一條明顯的band
但是我要壓的synuclein應該只有14左右
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.145.91
推
02/08 03:58, , 1F
02/08 03:58, 1F
→
02/08 03:59, , 2F
02/08 03:59, 2F
推
02/08 19:03, , 3F
02/08 19:03, 3F
推
02/08 22:33, , 4F
02/08 22:33, 4F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章