Re: [問題]有 total cell lysate的濃縮法嗎?
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: ※ 引述《lail.bbs@ptt.cc (逃避不是辦法阿)》之銘言：
: > 大家好
: > 最近在一直在作western,
: > 觀察的材料是total cell protein
: > 因為所使用的抗體很貴,所以都用小片的電泳膠
: > 但是因為想觀察的蛋白質需要用到較多的質量(ug)
: > 又因為sample數量多
: > 所以每次能夠load的體積有限,且分多次load跑出來的結果也比較容易不美麗
: > 除了在收蛋白質時,使用較少的lysis buffer
: > 有沒有方法可以濃縮已收下的蛋白質
: > 因為用少量的lysis buffer操作時對我而言較困難
: > 所以希望知道是否有事後濃縮蛋白質的方法
: > 先在此謝謝大家!
: 除了前面提過的透析, ultra filter 以外
: 冷凍乾燥也是一個方法
: 不過一片膠片能容納的總蛋白質也是有限的
: 超級高濃度的 lysate 很難跑得好
: 我倒是覺得可以用厚片的膠片（用厚的 spacer）
冷凍乾燥的方法我覺得有點冒險~
厚的膠是一種方法~
不過 我會建議你~
不管怎樣濃縮 gel的capacity也是有極限的
超過它的極限 訊號會很難band band分明~
如果你濃縮tatal lysate 其他不是目標的蛋白也相對提高
做western去影響訊號的可能性也提高
所以我會建議
也許你在破細胞的過程就先粗略做分離
譬如說 分細胞質 核 膜
當然 也要看你的實驗想看的是什麼~
是否適合這樣做~
可以參考看看囉~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.139.46.47
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