[問題] 請問有沒有人在做protein上的醣染色

看板Biotech (生命科學)作者 (布貓抱抱)時間19年前 (2007/03/23 16:19), 編輯推噓4(402)
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現在在做蛋白上的醣染 就是在跑完SDS PAGE後針對Glycoprotein做染色 使用的是 PIERCE GelCode系列 Glycoprotein staining kit 產品如下 http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=ProductFamily&ID=02051020 簡單來說就是將膠先用methamol固定, 再將背景buffer置換成醋酸, 氧化,染色,還原, 以水洗過之後 再置於醋酸中(保存)。 理論上在還原劑下去之後是中止反應, 具有醣修飾的蛋白會被染成洋紅色。 我們的確也在最後完成的時候可以看見清楚的band, 但在用玻璃紙封膠的完畢乾燥之後, 整塊膠都變成一桶洛神花茶一樣的深桃紅色 ( ̄□ ̄|||)a 在試過幾次之後 因為曾經有一次不小心讓膠在水裡多放了10幾秒 發現膠變成淡淡的粉紅色 所以我們猜想應該跟水有關係.... 到後來就乾脆直接用醋酸封膠, 然後還是得到深桃紅的膠..... 詭異的是,曾經有兩個前輩做過這實驗, 卻是淺淺的粉紅色背景。 但是他們表示就是照著protocal做沒有更改什麼 @@.... 不知道有沒有哪位版友做過類似實驗的,可以提供點意見嗎? 感激不盡。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.75.190.126

03/23 20:40, , 1F
我猜是醋酸沒洗乾淨,因為銀染也是這樣!
03/23 20:40, 1F

03/24 02:38, , 2F
請問樓上 是說reduse後要用大量醋酸洗嗎
03/24 02:38, 2F

03/24 02:39, , 3F
或是說醋酸後要用大量水洗?? 謝謝^^
03/24 02:39, 3F

03/24 15:02, , 4F
洗到完全沒醋酸味,多洗幾次嚕
03/24 15:02, 4F

03/24 23:24, , 5F
Schiff's Stain好像本來就不能久放 要在一定時間內紀錄 久了
03/24 23:24, 5F

03/24 23:25, , 6F
就會變成 紅吱吱的 老闆拿過他以前的膠來看 都馬是紅的一片
03/24 23:25, 6F
文章代碼(AID): #160urwLo (Biotech)
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