Re: 請問一下這兩個vector的差別
※ 引述《wkj1020 (Aj)》之銘言：
: ※ 引述《wkj1020 (Aj)》之銘言：
: : pET41a, pGEX-4T1 都是在N端接GST的vector
: : 請問一下這各vector除了廠商, 抗生素 有差之外
: : 有沒有其他的差別??
: : 還有BL21(DE3) 跟 rosetta(DE3)(可能拼錯 是聽來的)
: : 這兩支菌有什麼差別???
: 事實上會問這各問題
: 是因為我的蛋白在pET41a表現完後會斷掉(就是在PAGE看到GST的BAND)
: 有人跟我說在pGEX 系統比較不會斷(!!?)
: 不知道原理是什麼所以想了解一下
我用的是pGXE2T的vector，
但我的recombinant protein也會斷掉，
我認為protein會truncated，應該是protein在E. coli本身的問題(如：你的protein在E.
coli有protease的hot spot)
或lysis中degrad掉了，
你可以多試其他的E. coli expression host或是induction的環境(例如調整較mild溫度
或IPTG濃度)
我之前用serine protease knockout E. coli並沒有改善truncated的現象，
但你也可以試試喔，
我最後是改變induction環境，斷掉的protein就少很多了，
祝你實驗順利^^
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◆ From: 140.112.206.250
※ 編輯: turtledodoha 來自: 140.112.206.250 (03/26 01:28)
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