Re: [問題] 請問ligation的一些問題
我覺得你的做法好像怪怪的
: f大大
: 可否請教一下您家都用什麼方式純化嗎
: 因為我們家 都亂用 大家都覺得純化效率很差
: 目前我取60ul(3000ng/ul)的dna去切 (我強烈懷疑這個質是假的
這個DNA的量真的很多耶...總共有180ug呀...
那麼你是使用多少酵素去切呢
如果是NEB的EcoRI的話1ul是20U(印象中)
那麼需使用9ul的酵素???
: 但最後膠純化後體積100ul
通常膠體純化不會溶於這麼多水阿
為了讓DNA的濃度提高
大概只會用30ul的水
: 濃度我估計只有5ug/ul 也就是我切了如此大量的dna卻只回收到500ng左右
DNA有兩種定量方式
跑膠或是測OD
為什麼要自己估計阿
可以回收5ug/ul...這個量真的不是普通的高耶...
而且5ug/ul體積100ul那麼總共是500ug的DNA阿...不是500ng
還有原本只有180ugDNA,為什麼純化後有500ug的DNA啊
你是不是寫錯了???
: 所以想請教一下f大 用了多少dna去切 用什麼方式純化
如果是用column純化的話
有最大量的限制
大概是40ug左右(廠牌不同會有所差異)
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