[問題] tansformation失敗?!
看板Biotech (生命科學)作者kotenka (Egg Dance)時間17年前 (2007/05/05 00:16)推噓10(10推 0噓 11→)留言21則, 6人參與討論串1/2 (看更多)
不好意思，我現在大三，在實驗室做專題，想問個基礎實驗的問題
老師叫我做一個clone，前面的步驟都很成功
最後用有抗生素的medium篩，挑出八個菌落養菌後跑PCR
有七管夾出正確大小的片段，而且band都蠻明顯的的
但今天抽plasmid出來，再用酵素切割，卻切不出那條片段
學姊跟老師也覺得很奇怪，因為從PCR的結果來看，不像是偽陽性
http://0rz.tw/2e2D5
切位是BamHI和EcoRI，剛剛被室友一問，我想到今天用的BamHI是新的
除了這個之外還有其他導致失敗的可能原因嗎......
http://0rz.tw/d02D3 第一次沒有定量，加15μl質體去切，老師說太多了切不動
http://0rz.tw/e32FG 測濃度之後plasmid定量為6μg去切割，酵素都0.5μl
會亮成這樣是學長建議我換新的EtBr試試看
最左邊是200,400,600,800,1000,1200marker
最右邊是lambda/HindⅢ fragments
中間六個是我切割後的plasmid，insert大小應為384nt，vector是pCDNA3.1
學姊說直接重做就好反正原因也想不出來了
但我還是想知道問題"有可能"是出在哪，這樣下次重做可以多注意一些細節
先謝謝各位了......
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十二少:
如花 不如我給你一個密碼 我只說一遍
你要記住 不然你永遠找不到我
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